[发明专利]一种筛选反硝化细菌的方法

权利要求书

1.一种筛选反硝化细菌的方法，其步骤包括：

(1)反硝化细菌的富集培养：将人工湿地中初筛得到的反硝化细菌菌源与培养基混合后摇床培养；再将摇床培养得到的菌悬液置于富集培养基中富集培养，得到反硝化细菌菌液；

(2)反硝化细菌的固体培养：将步骤(1)中的反硝化细菌菌液接种于平板分离基上，然后将平板分离基置于25℃-30℃条件下培养，直至菌落生长良好；

(3)挑取步骤(2)中得到的反硝化菌株的斜面菌种接种于活化培养基中摇床培养，再用无菌生理盐水离心洗涤并稀释后冷藏备用。

2.根据权利要求1所述的一种筛选反硝化细菌的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，反硝化细菌菌源和培养基按照体积比为1∶10进行混合后摇床培养7-10天，培养温度为30℃，旋转转速为70～80转/分钟。

3.根据权利要求1所述的一种筛选反硝化细菌的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，富集培养基的组成包括以下比例的原料：柠檬酸钠、MgSO₄·7H₂O、K₂HPO₄·3H₂O、KNO₃、KH₂PO₄及蒸馏水的用量比为5.0g∶0.2g∶1.0g∶2.0∶1.0g∶1000mL，所述富集培养基的pH值为7.2～7.5，121℃条件下灭菌15分钟。

4.根据权利要求1所述的一种筛选反硝化细菌的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，平板分离基为营养琼脂，分离基的pH为7.0-7.2，121℃条件下灭菌15分钟。

5.根据权利要求1所述的一种筛选反硝化细菌的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，摇床培养温度为25℃-30℃，培养培养时间为18-25小时，将离心洗涤后的菌株用无菌生理盐水稀释并在0℃-4℃条件下保存。

6.一种如权利要求1所述的筛选反硝化细菌的方法，其特征在于：所述反硝化细菌的鉴定方法包括以下步骤：

(a)将步骤(3)中得到的备用反硝化细菌菌液按照10％的接种量，接种于养殖废水中，28℃-32℃条件下摇床培养24小时；

(b)在摇床培养过程中，每隔2小时取样1次，每次取样量为10mL，并测定样品中氨氮、亚硝态氮含量。