[发明专利]用于无标记h-IGg阻抗型免疫传感器的氧化还原探针的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于无标记h-IgG阻抗型免疫传感器的氧化还原探针的制备方法。

背景技术

免疫球蛋白 G(h-IgG)是人体血清中含量最高的抗体 ,占血清中免疫球蛋白的70～80 % ,是唯一能通过胎盘的免疫球蛋白,具有抗菌、抗病毒、抗毒素的特性,在机体免疫防护中起着重要作用。同时，IgG还是保持人体健康的重要物质，市场上出现了许多富含IgG的保健食品如牛初乳片等。在临床检测中，IgG含量的变化也是判定病变的重要指标。因此，建立一种新型、快速免疫球蛋白 G(h-IgG)的检测方法，对食品安全、生物分析检测具有积极的作用。无标记电化学免疫传感器通过直接测定抗原抗体复合物形成时的物理、化学变化，极大地简化制备和操作过程，适应直接、实时、原位、在线的痕量免疫分析，已经广泛应用于临床医学、环境、制药、食品等分析领域中。氧化还原探针的选择对无标记电化学免疫传感器的应用效果具有重要的影响，这是因为其分析原理是基于测定抗原/抗体结合前后，氧化还原探针分子同电极之间的电子转移速率或电子转移阻抗的变化，来实现抗原/抗体高灵敏检测的目的。常见的氧化还原探针K₄Fe(CN)₆常常无法作为电化学免疫传感器的探针。因此，不断开发适合各种抗原/抗体的检测的无标记电化学免疫传感器的氧化还原探针具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的就是为无标记h-IgG阻抗型免疫传感器提供一种氧化还原探针，以提高无标记h-IgG阻抗型免疫传感器的检测性能。

本发明的目的是通过如下步骤来实现的：

1. 一种用于无标记h-IGg阻抗型免疫传感器的氧化还原探针，由β-巯基乙胺缩3,5-二溴水杨醛席夫碱镍配合物无水乙醇溶液、纳米金溶胶组成。

上述β-巯基乙胺缩3,5-二溴水杨醛席夫碱结构式为：

                                                 。

 2.所述的氧化还原探针的制备步骤为：

（1）合成β-巯基乙胺缩3,5-二溴水杨醛席夫碱：

 在搅拌的条件下，向10mL溶有4-8mmol3,5-二溴水杨醛的无水乙醇溶液中,缓慢滴加10mL含4-8mmolβ-巯基乙胺的无水乙醇溶液，60℃水浴加热4小时,得浅黄色沉淀，用无水乙醇重结晶，真空干燥即得β-巯基乙胺缩3,5-二溴水杨醛席夫碱粉末。

（2）合成β-巯基乙胺缩3,5-二溴水杨醛席夫碱镍配合物：

将无水乙醇和N,N′—二甲基甲酰胺(DMF)按体积比为2:1制成混合溶剂，在搅拌的条件下，向5mL溶有0.5-1.5mmol步骤（1）制得的β-巯基乙胺缩3,5-二溴水杨醛席夫碱的上述混合溶剂中缓慢滴加8mL含1-3mmol乙酸镍的N,N′—二甲基甲酰胺溶液,75℃水浴加热4小时,得深棕色沉淀，用无水乙醇重结晶，真空干燥即得β-巯基乙胺缩3,5-二溴水杨醛席夫碱镍配合物粉末。

（3）制备氧化还原探针：

取0.01g-0.05g步骤（2）制得的β-巯基乙胺缩3,5-二溴水杨醛席夫碱镍配合物粉末，在室温下搅拌溶于50mL无水乙醇中,取此溶液15-25μL缓慢加入到7mL-12mL纳米金溶胶中，在36℃下混合均匀后的溶液即为本发明的氧化还原探针。

本发明的氧化还原探针制备简单，用于无标记h-IGg阻抗型免疫传感器检测h-IGg含量，具有检测限低、稳定性好和重现性好等优点。

具体实施方式

实施例：

（1）合成β-巯基乙胺缩3,5-二溴水杨醛席夫碱：

在搅拌的条件下，向10mL溶有6mmol3,5-二溴水杨醛的无水乙醇溶液中,缓慢滴加10mL含6mmolβ-巯基乙胺的无水乙醇溶液，60℃水浴加热4小时,得浅黄色沉淀，用乙醇重结晶，真空干燥即得β-巯基乙胺缩3,5-二溴水杨醛席夫碱粉末。

（2）合成β-巯基乙胺缩3,5-二溴水杨醛席夫碱镍配合物：

将无水乙醇和N,N′—二甲基甲酰胺(DMF)按体积比为2:1制成混合溶剂，在搅拌的条件下，向5mL溶有1mmol步骤（1）制得的β-巯基乙胺缩3,5-二溴水杨醛席夫碱的上述混合溶剂中缓慢滴加8mL含2mmol乙酸镍的N,N′—二甲基甲酰胺溶液,75℃水浴加热4小时,得深棕色沉淀，用无水乙醇重结晶，真空干燥即得β-巯基乙胺缩3,5-二溴水杨醛席夫碱镍配合物粉末。

（3）制备氧化还原探针：