[发明专利]以脂筏修饰的色谱柱及其制法和在中药抗肿瘤活性部位筛选中的应用

权利要求书

1.一种以脂筏修饰的硅胶色谱柱，其特征是：它是表面修饰有脂筏的硅胶色谱柱。

2.根据权利要求1所述的色谱柱，其特征是：所述的脂筏是TrkA脂筏。

3.一种制备权利要求1所述的以脂筏修饰的硅胶色谱柱的方法，其特征是它包括以下步骤：

步骤1. U251细胞的培养及扩增：

用含10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基培养和扩增U251细胞，调整细胞数浓度为1×10⁷~10×10⁷个/ml，备用；

步骤2. 脂筏的制备：

收集步骤1所得的U251细胞，以非离子型去污剂TritonX-100抽提脂筏组分，蔗糖密度梯度离心法离心收集，将脂筏-蔗糖混悬液置4℃，pH7.2～7.5的80-120mM Tris-HCL溶液中透析20～26h，合并透析液共9 ml备用；

步骤3. 脂筏修饰的层析硅胶的制备：

将层析硅胶小球混悬于盐酸溶液中，超声处理10～20min；搅拌下回流1～3h；蒸馏水洗涤，重复操作2～4次；抽干，于110～120℃活化5～8h，作为硅胶载体备用；取步骤2所述的9ml含有脂筏的Tris-HCL溶液加入3～5g活化处理后的硅胶中，置2～6℃，恒温振摇20～26h；22～28℃静置1～3h；加入pH 7.2～7.5的100mM Tris-HCL 15～25ml，混匀后静置3～8min；2～6℃500rpm离心8～12min，弃去上清，加入PBS，混匀后放置3～8min；重复三次；得到表面修饰有脂筏的硅胶的混悬液，该悬浊液可填充2-5支色谱柱；

步骤4. 以步骤3得到的表面修饰有脂筏的硅胶的混悬液为填料湿法装柱，即得以脂筏修饰的硅胶色谱柱。

4.权利要求1所述的以脂筏修饰的硅胶色谱柱在中药抗肿瘤活性组分在线筛选中的应用。