[发明专利]一种小单孢菌及利用该菌制备多种抗生素的方法

权利要求书

1.小单孢菌（Micromonospora rosaria）SCSIO N160，其保藏编号为：CCTCC NO:M 2012392。

2.一种制备抗生素rosamicin，6108B，M4365-A1，M4365-G1，fluostatinC，fluostatin D，fluostatin E，fluostatin F，fluostatin I，fluostatin J，fluostatin K，rabelomycin和phenanthroviridone的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（a）制备权利要求1所述的小单孢菌（Micromonospora rosaria）SCSIO N160的发酵培养物，将该发酵培养物的发酵液和菌丝体分开，发酵液经丁酮萃取，丁酮萃取层经过蒸馏浓缩后得到浸膏A；菌丝体先用丙酮浸提，浸提液回收丙酮后剩余的水相混合液用丁酮萃取，丁酮萃取层经过蒸馏浓缩后得到浸膏B；将浸膏A与B合并为浸膏C；

（b）浸膏C经硅胶柱层析，以体积比从100:0~0:100的氯仿-甲醇作为流动相梯度洗脱，氯仿-甲醇体积比为98:2梯度下洗脱下来的馏分Fr1，氯仿-甲醇体积比为95:5梯度下洗脱下来的馏分Fr.2，氯仿-甲醇体积比为90:10梯度下洗脱下来的馏分Fr.3，氯仿-甲醇体积比为50:50梯度下洗脱下来的馏分Fr.4；

馏分Fr.2经凝胶柱层析，用体积比为1:1的氯仿-甲醇作为流动相洗脱，得到馏分Fr.2-A至Fr.2-H，将馏分Fr.2-C经中压反相层析，以体积比从100:0~0:100的甲醇：水线性梯度洗脱，收集体积比甲醇：水=35：65的馏分得化合物rosamicin，将馏份Fr.2-D上中压反相柱，以体积比从100:0~0:100的甲醇：水线性梯度洗脱，收集体积比甲醇：水=40：60的馏分得化合物6108B，将馏份Fr.2-E用高压液相制备，流动相为体积比水：乙腈=70:30，纯化得到化合物M4365-A1，将馏分Fr.2-F用高压液相制备，流动相为体积比乙腈：水=72:28，纯化得化合物M4365-G1；

馏分Fr.1经凝胶柱层析，用体积比为1:1的氯仿-甲醇作为流动相洗脱，得到馏分Fr1-A，Fr1-B，Fr1-C，Fr1-D，Fr1-A经中压反相层析，用体积比100:0~0:100的甲醇：水线性梯度洗脱，收集体积比甲醇：水=58：42的馏分得化合物fluostatin I，收集体积比甲醇：水=50：50的馏分得Fr1-A-2，Fr1-A-2用高压液相制备，用体积比乙腈：水=80：20为流动相洗脱，纯化得化合物fluostatin C和化合物fluostatin E；Fr1-B用高压液相制备，用体积比乙腈：水=65:35为流动相，纯化得化合物fluostatin F和化合物rabelomycin；Fr1-C用硅胶柱层析，以体积比100:0~0:100的氯仿-甲醇作为流动相梯度洗脱，收集体积比氯仿：甲醇=60：40的馏分得Fr1-C-(3)，Fr1-C-(3)通过PTLC层析，以氯仿：丙酮体积比为65:35为展开剂展开，收集比移值为0.8的馏分，得化合物fluostatin D；Fr1-D以凝胶柱层析，用氯仿：甲醇体积比5:5洗脱，再用高压液相制备，用体积比乙腈：水=60:40为流动相，纯化得化合物fluostatin K、化合物fluostatin J和化合物phenanthroviridone。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的制备小单孢菌（Micromonospora rosaria）SCSIO N160的发酵培养物是通过以下方法制备：将活化的小单孢菌SCSIO N160接入种子培养基中，28℃，200rpm，培养144h制得种子液，将种子液以10%的接种量接入到发酵培养基中，28℃，200rpm，振荡培养120h，而制得发酵培养物，所述的种子培养基和发酵培养基的配方都为每升培养基中含有：淀粉10g，葡萄糖20g，酵母粉10g，玉米粉3g，牛肉膏3g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，K₂HPO₄0.5g，CaCO₃2g，粗海盐30g，余量为水，pH 7.2。

4.权利要求1所述的小单孢菌（Micromonospora rosaria）SCSIO N160在制备抗生素rosamicin、6108B、M4365-A1、M4365-G1、fluostatinC、fluostatin D、fluostatin E、fluostatin F、fluostatinI、fluostatin J、fluostatin K、rabelomycin或phenanthroviridone中的应用。