[发明专利]一种合成多肽及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种合成多肽产品，具有以下氨基酸序列特征：H2N-琥珀酰-L-丙氨酸-L-丙氨酸-L-脯氨酸-L-苯丙氨酸-OH。

2.根据权利要求1所述的多肽产品，是经过以下步骤制备而来：

(1)树脂上载

将取代度约0.5mmol/g的2-Cl-Trt树脂5g置固相反应管中，以含5％DIPEA的DCM溶液洗涤树脂2次。将Fmoc-Phe-OH(5.142g，5.7mmol)溶于DCM(30ml)中，加入DIPEA(2.615ml，15mmol)，全部溶解后加入树脂中，室温摇摆反应2h，抽干后用DCM(30ml)洗涤树脂3次，加入DCM-MeOH-DIPEA(17∶2∶1)混合液反应30min封闭未反应的树脂，抽干后用DCM(30ml×2)、DMF(30ml×2)交替洗涤3次，最后用无水乙醚洗涤2次后抽干，红外干燥后得树脂9.873g，用UV-Fmoc方法测得上载后的取代度为0.62mmol/g，上载产率为98.4％。

(2)微波辅助脱除Fmoc保护基

将树脂转移至100ml微波反应管中，加入含20％哌啶的DMF溶液30ml，氮气鼓泡，微波功率65W，温度50℃，反应时间3min。之后抽除反应液，再加入含20％哌啶的DMF溶液30ml以相同微波条件再反应1次，抽除反应液后以DCM(30ml×2)、DMF(30ml×2)交替洗涤3次。

(3)微波辅助氨基酸缩合反应

Fmoc保护氨基酸(10mmol)、HATU(3.147g，10mmol)和HOOBt(1.391g，10mmol)共同溶于DMF(30ml)中并加入DCM(5ml)，冰水浴冷却至5℃，加入DIPEA(1.743ml，10mmol)后混合均匀反应1min，将该反应液加至脱除保护基后的树脂中，通氮气鼓泡混合，微波功率45W，时间5min，温度50℃。之后抽干反应液，以DCM(30ml×2)、DMF(30ml×2)交替洗涤3次，取少量树脂以Kaiser方法检测缩合情况，确认结果为阴性后脱除Fmoc保护基。

(4)裂解树脂制备H2N-琥珀酰-L-丙氨酸-L-丙氨酸-L-脯氨酸-L-苯丙氨酸-OH将完成所有缩合循环后的树脂以DCM(30ml×2)、DMF(30ml×2)交替洗涤2次后转至100ml茄形瓶中，以无水乙醚(30ml×3)洗涤，以带有PP滤头的聚四氟乙烯(PTFE)管抽干后置于红外灯下充分干燥。向树脂中加入TFA-苯甲硫醚-苯甲醚(90∶5∶5)(70ml)，氩气保护下搅拌反应2h。完毕后过滤，滤液缓慢滴至冰无水乙醚(2L)中，产生沉淀，离心(2500×g)3min，弃去上清液，沉淀再用无水乙醚搅拌-离心-弃上清重复操作5次，合并沉淀，置真空干燥箱中于40℃避光干燥6h，得类白色固体(6.264g，以树脂计粗产率为89.7％)。