[发明专利]一种目的蛋白制备方法及其用途有效
申请号: | 201210470566.1 | 申请日: | 2012-11-19 |
公开(公告)号: | CN103131713A | 公开(公告)日: | 2013-06-05 |
发明(设计)人: | 任宏伟;凡复;林昳;章永垒;梁洁 | 申请(专利权)人: | 厦门北大之路生物工程有限公司 |
主分类号: | C12N15/12 | 分类号: | C12N15/12;C12N15/81;C07K14/435;A61K38/17;A61P25/04 |
代理公司: | 厦门市诚得知识产权代理事务所(普通合伙) 35209 | 代理人: | 赖开慧 |
地址: | 361000 福建省厦*** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 目的 蛋白 制备 方法 及其 用途 | ||
1.一种目的蛋白的制备方法,其特征是:包括如下步骤,
目的蛋白核苷酸序列片段的获得;
目的蛋白重组表达载体的构建;
目的蛋白的诱导表达;
目的蛋白的纯化;
纯化产物的切割;
所述目的蛋白的核苷酸序列片段的前面插入单体切割的识别位点;优选地,在目的蛋白的核苷酸序列片段上游引入kex2酶切位点,在下游引入盐酸羟胺切割位点;
所述目的蛋白的核苷酸序列片段通过SOE技术获得,通过引物引入单体切割的识别位点;
优选的,目的蛋白是人神经生长因子,胸腺肽、虎纹克胰肽、虎纹镇痛肽。
2.权利要求1的制备方法,其特征在于,在纯化之前还包括鉴定蛋白表达的步骤。
3.权利要求1或2的制备方法,其特征在于,所述目的蛋白重组表达载体构建中的目的蛋白基因是一个或一个以上拷贝。
4.权利要求3的制备方法,其特征在于,所述一个以上拷贝通过一个拷贝目的蛋白重组表达载体经过酶切连接制备得到。
5.权利要求1或2的制备方法,其特征在于,当所述目的蛋白基因是一个以上拷贝时,是以目的蛋白表达盒为单位进入表达载体进行克隆的;
优选地,当得到一个拷贝数的重组表达载体时,在此基础上经过酶切连接等手段重组得到两个拷贝数的重组表达载体;
依次类推,得到一个以上拷贝数的各重组表达载体。
6.权利要求1或2的制备方法,其特征在于,所述单体切割的识别位点被化学试剂或酶切割,优选地,化学试剂为溴化氰、甲酸或羟胺,酶试剂为胰蛋白酶、梭菌蛋白酶、弗林蛋白酶、凝血酶为亮氨酸氨肽酶。
7.权利要求1或2的制备方法,其特征在于,所述的载体为酵母表达载体。
8.权利要求1或2的制备方法,其特征在于,所述的目的蛋白的纯化为采用HPLC进行纯化。
9.权利要求1-8任一方法所得的目的蛋白。
10.权利要求9的目的蛋白用于医药的用途。
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