[发明专利]一种基于合成肽检测羊痘病毒血清抗体的试剂盒

权利要求书

1.一种基于合成肽检测羊痘病毒血清抗体的试剂盒，其特征在于包括以下步骤制备而成：

a.利用DNAstar软件设计针对羊痘病毒主要免疫蛋白P32的两条短肽片段；

b.将步骤a所设计序列采用常规合成肽方法合成肽段；

c.采用方正滴定方法，确定合成肽抗原包被ELISA板的浓度；

d. 将阴性、阳性血清用PBS稀释为1:10，1:20，1:40，1:80，1:160　5个稀释度，进行ELISA检测，取P/N值最大、OD值接近1的血清最大稀释倍数为最适稀释度，确定阳性血清、阴性血清及待检血清稀释度和反应时间；

e.利用棋盘滴定法选择工作浓度，根据“阳性血清OD值接近1”和“阳性值/阴性值最大”的原则，确定酶标记抗体工作浓度及反应时间；

f. 采集未免疫过羊痘病毒疫苗的健康羊血清，测其OD值并除以标准阴性血清的OD值(S/N，样品/阴性), 将所得到比值的平均值加标准差作为判定阴/阳性的临界值。

2.根据权利要求1所述一种基于合成肽检测羊痘病毒血清抗体的试剂盒，其特征在于，所述肽段序列如下：

A：PELKSDNDIFYKKVDTVKDFKNSDVNFFLKDKKDDI

B: YKLEKELKLNRQVLNDSSKYILHNTKYLSKKRANEMKN。

3.根据权利要求1或2所述一种基于合成肽检测羊痘病毒血清抗体的试剂盒，其特征在于:所述步骤c确定合成肽最佳包被浓度为0.3ug/孔，其中A:B的比例为1:1。

4.权利要求1或2所述一种基于合成肽检测羊痘病毒血清抗体的试剂盒，其特征在于：所述步骤d的标准阳性血清、标准阴性血清和待检血清样品稀释度的体积比均为1:20；标准阳性血清、标准阴性血清和待检血清最佳反应时间为45min。

5.权利要求1或2所述一种基于合成肽检测羊痘病毒血清抗体的试剂盒，其特征在于：所述步骤e酶标抗体工作浓度为：用PBS将兔抗羊IgG-HRP(辣根过氧化物酶标记免疫球蛋白G)作1:400体积比稀释为酶标记抗体的最佳稀释度；酶标抗体最佳反应时间为45 min。

6.权利要求1所述一种基于合成肽检测羊痘病毒血清抗体的试剂盒，其特征在于：所述步骤f确定的判定标准为：S/N值≥2.20为阳性，S/N值≤1.65为阴性，S/N值介于2.20和1.65之间者为可以，应重测，重测后S/N≥2.20判为阳性，S/N值＜2.20判为阴性。