[发明专利]采用大孔树脂吸附提取油橄榄叶抗糖尿病有效部位的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种采用大孔树脂吸附提取油橄榄叶抗糖尿病有效部位的方法。 

背景技术

糖尿病（diabetes）是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征，临床上以高血糖为主要特点，典型病例可出现多尿、多饮、多食、消瘦等表现，即“三多一少”症状，糖尿病（血糖）一旦控制不好会引发并发症，导致肾、眼、足等部位的衰竭病变，且无法治愈。 

根据中国糖尿病信息网报道，目前全世界有超过一亿糖尿病人，其中我国接近二千万，并有逐年增加的趋势。病死率仅次于恶性肿瘤及心血管病，是危及人类生命的第三大疾病。其中Ⅱ型糖尿病（NIDDM）病例约占90%或以上，每年治疗费用超过千亿元，因此开发安全有效的治疗NIDDM药物迫在眉睫。 

对于胰岛素依赖型糖尿病的治疗，多采用注射胰岛素，但胰岛素久用产生抗体，生物活性降低，剂量增加，产生高胰岛素血症，促使微血管病变发生与发展。而对于非胰岛素依赖型糖尿病的治疗，西药降糖药为数不少。根据其化学特性主要分为两大类，即磺脲类，如优降糖，美吡达，甲磺吡脲，克糖利等，但此类药久用损害肝脏、肾脏及血细胞，与磺胺药交叉过敏，后期产生继发性失效；双胍类，如降糖灵，降糖片等，但此类药疗效低、副作用大，久用产生高乳酸血症。近年国内对降糖中药也作了不少研究，出现了“糖脉康”等中药复方制剂，但成分清楚，能进入国际市场的中药品种还没有。从中药中寻找高效低毒，降糖物质基础明确的新药一直是中外药学工作者关注的热点。 

油橄榄(Olea europare L．)为木犀科(Oleaceae)木樨榄属(Olea)植物，主要分布在欧洲地中海沿岸国家和美国加州地区。自20世纪60年代起，我国甘肃、陕西、四川、云南等地开始引种各品种油橄榄，甘肃陇南市是我国油橄榄最大的种植基地之一。现代药理学研究表明，油橄榄叶提取物具有抗氧化、抗真菌、降血压、降血脂、降血糖等生理活性。本发明建立一种应用大孔树脂技术从油橄榄叶中提取天然抗糖尿病活性成分的工艺方法。 

发明内容

本发明目的在于提供一种利用大孔树脂筛选出天然抗糖尿病活性成分含量高且降糖效果显著的油橄榄叶天然抗糖尿病有效部位的方法。 

首先将油橄榄叶用乙醇水溶液提取，提取液浓缩后经过大孔吸附树脂吸附，吸附完毕后先用水洗涤树脂柱除去水溶性杂质，再用不同体积浓度的乙醇水溶液进行解吸附，合并解吸液，回收溶剂后得到油橄榄叶A、B、C、D、E、不同部位，通过α-淀粉酶抑制实验、非酶糖基化抑制实验和体外HepG2细胞实验，确定其中D部位具有良好的抗糖尿病活性。 

一种采用大孔树脂吸附提取油橄榄叶抗糖尿病有效部位的方法，其特征在于该方法依次步骤为： 

A提取：取油橄榄的干燥叶，加入1-20倍量的乙醇水溶液，加热回流提取1-4 次，每次1-3 h，过滤，合并提取液，浓缩至相当于原药材0.1-0.5 g/mL，充分混匀，称作上样液；

B大孔树脂分离纯化：上样液经过大孔吸附树脂柱进行吸附，吸附完毕后，树脂柱先用水洗涤以除去水溶性杂质；弃去洗涤液，然后加入不同浓度的乙醇水溶液对大孔树脂柱进行梯度解吸附；分别合并不同浓度的解吸液，回收溶剂后浓缩干燥，制得油橄榄叶A、B、C、D、E五个部位，其中D部位为抗糖尿病活性部位。

上述制备方法中，大孔吸附树脂选自苯乙烯和二乙烯基苯基质交联得到的大孔吸附树脂。 

上述制备方法中，上样液可以在大孔树脂柱上吸附一次，也可以循环吸附。 

上述制备方法中，大孔树脂柱吸附后解吸液为乙醇水溶液，不同部位由不同浓度的乙醇水溶液解吸得到。 

上述制备方法中，上样液的吸附流速为0.5-20 BV/h。 

上述制备方法中，提取液浸膏与干树脂的重量比是1:1-10；所述的树脂柱径和柱高比为1:1-20。 

试验例1：α-糖苷酶抑制实验 

1.样品对照管溶液配制：分别精密称取部位A、B、C、D、E，用水（含0.5%DMSO）超声溶解，配制成不同浓度（30、40、50、60、70、80、90、100 mg·L^-1)的待测样品溶液，备用。