[发明专利]一种基于点击化学仿生分子印迹电化学传感器的制备及对食品过敏原的检测

权利要求书

1.一种基于点击化学食品过敏原仿生分子印迹电化学传感器的制备及应用，其特征是包括以下步骤：

（1）选择与电极表面固定的叠氮烷基硫醇，制备叠氮端基的自组装单层膜；

（2）通过点击化学反应，对叠氮端基的自组装单层膜进行端基烯基功能化；

（3）选择能与过敏原反应合成过敏原仿生分子印迹聚合物(MIPs)的功能单体；

利用现有方法制备出石墨烯材料，掺入到仿生分子印迹聚合物；

（5）按一定物质的量比将食品过敏原的模板分子、功能单体、石墨烯、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂混合均匀，制备分子印迹聚合物溶液；

（6）将分子印迹聚合物溶液滴于经过（2）处理过的电极表面，紫外光引发制备掺有石墨烯的仿生分子印迹聚合物。

2.根据权利要求1所述点击化学食品过敏原仿生分子印迹的制备方法,其特征是：所述食品过敏原仿生分子印迹聚合物的模板分子、功能单体、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂的物质的量比为0.1～1∶1∶0.5～5∶20～55∶0.05～0.2∶1.5～30，每毫升中掺入10mg石墨烯。

3. 根据权利要求1所述点击化学食品过敏原仿生分子印迹的制备方法,其特征是：所述掺有石墨烯材料的仿生分子印迹聚合物MIPs修饰到传感器检测痕量食品过敏原的方法，其特征是包括如下步骤： 

含过敏原食品经正己烷4℃浸提过夜，冷冻离心，收集上清液；用30%-50%饱和度硫酸铵沉淀的蛋白质组分溶解在PBS中，分别加硫酸至pH5.2或pH4.5等电点，离心后沉淀物溶液在PBS中，得到食品过敏原；

将所用金电极（Ф=4mm）用0.05μm的铝粉进行抛光，用piranha溶液（H₂SO₄/H₂O₂=3:1）浸泡5min，二次蒸馏水洗涤，氮气氛干燥，将清洗过的电极在0.5mol/L的H₂SO₄溶液中于-0.8~1.5V范围内进行循环伏安扫描至稳定，再用二次蒸馏水清洗干净，氮气氛下干燥4℃保存使用；

将（2）处理好的金电极，在1mmol/L硫代癸烷和2mmol/L叠氮十一烷基硫醇混合液中孵育24h，然后用二次蒸馏水洗涤干净，氮气吹干；

将步骤（3）制备好的电极浸入到丙烯酸丙炔酯溶液中，溶液中含有抗坏血酸和硫酸铜，避光放置20h，先用甲醇洗涤，然后二次蒸馏水洗涤，晾干；

将步骤（4）中晾干的工作电极上滴加MIPs溶液20μL，紫外光（365nm）下诱导聚合反应1h，然后将工作电极用洗脱剂洗脱10-15分钟，在室温下干燥5-10分钟，成功制备过敏原仿生分子印迹膜电化学传感器，保存在4℃的冰箱中备用；

将制得的过敏原分子印迹膜电极连接到电化学工作站，对样品提取液中的过敏原进行检测。

4. 根据权利要求1所述的叠氮烷基硫醇为叠氮十一烷基硫醇，丙烯酸丙炔酯对叠氮端基的自组装单层膜进行端基烯基功能化。

5. 根据权利要求1所述的模板食品过敏原可以是水溶性并与功能单体、交联单体相容。

6. 根据权利要求1所述洗脱液为可以将模板蛋白从印迹膜上洗脱的缓冲溶液、盐溶液、碱溶液和变性剂等，包括各种浓度的磷酸盐缓冲溶液或NaCl盐溶液和NaOH碱溶液或变性剂十二烷基硫酸钠等。