[发明专利]高通量微流控纸芯片即时快速检测多种人体肿瘤标志物

权利要求书

1.本发明用碳纳米管多通道免疫微流控纸芯片的制造方法，其特征包括以下步骤：

（1）在色谱纸上用蜡打印机打印设计的通道图案，用电子控温仪器对蜡印的色谱纸进行加热，目的是将蜡烤化并使其均匀的渗透到色谱纸的内部，从而在未印蜡的部位形成亲水通道；

（2）选择病人体内的某几种肿瘤标志物作为抗原，并制备与抗原一一对应的抗体；

（3）采用辣根过氧化物酶标记的抗体作为二抗，便于检测电化学信号；

（4）将纳米材料修饰于处理后的纸芯片通道上，用以提高微流控纸芯片的导电性，提高其灵敏度；

（5）在步骤（4）之后修饰用于捕捉抗体的壳聚糖等多糖类；

（6）处理好的微流控纸芯片需要与丝网印刷电极相结合检测电信号；

（7）丝网印刷电极在使用前需要用抛光粉打磨光滑，备用。

2.本发明所述电极为多电极体系形成的多通道免疫，多通道数量可以在2—8之间；

本发明所述纳米材料包括石墨烯、碳纳米管、金纳米离子、金属氧化物、半导体等等； 

具体实施步骤包括：

（1）手动印刷本实验所用胶片电极，并用三氧化二铝抛光粉将电极打磨光滑，备用；

（2）使用蜡打印机打印设计好的图案，并使用电子控温仪器对印蜡的色谱纸进行加热，使蜡均匀的渗透到色谱纸内部，未印蜡的区域形成微流控纸芯片通道；

（3）选用多壁碳纳米管，用硝酸和硫酸的混合酸酸化碳纳米管，使其带羧基；

（4）将100-200微升酸化的碳纳米管溶液滴到通道区域；

（5）待碳纳米管溶液在纸上完全干燥后，在通道区域滴加10-100微升的壳聚糖溶液；

（6）待壳聚糖溶液在纸上与碳纳米管结合完全，并稳定吸附于纸上后，通道区域滴加10-100微升的戊二醛溶液，并等其自然干燥；

（7）用pH为6.8的Tris-HNO₃缓冲溶液冲洗三次，冲洗方法为：正面滴加缓冲溶液，在反面用吸水纸引水；

（8）缓冲溶液干透后，在通道区域的两端分别滴加1-10微升的两种不同种类的一抗；

（9）重复步骤（7），洗去未吸附或吸附不牢固的抗体；

（10）待一抗溶液在a区域吸附稳固后，再滴加20-100微升的牛血清白蛋白溶液；

（11）重复步骤（7）；

（12）在通道区域滴加与步骤（8）中分别相对应的1-10微升的抗原，使其反应完全；

（13）在反应完全后，立即重复步骤（7）；

（14）缓冲溶液洗脱后即可在通道区域滴加相对应的5-20微升的二抗，使其充分反应；

（15）之后立即重复步骤（7）；

（16）在完成最后一步洗涤后，将微流控纸芯片通道放置于制备好的胶片电极上，并滴加一定浓度的双氧水，立即用电化学工作站进行检测，至此即可根据显示的电流值准确测定样品中抗原的浓度。