[发明专利]醛固酮磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析医学领域，具体的，本发明提供了一种醛固酮（ALD）磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

高血压是最常见的心血管病，是全球范围内的重大公共卫生问题。据卫生部最新数据，我国现有高血压患者2亿多人，在前十种慢性疾病患病率中高血压位居第一，且在逐年增加。高血压是引发高血压心脏病、冠心病、心力衰竭、慢性肾功能衰竭、脑血管疾病等的主要危险因素。临床上醛固酮、血管紧张素Ⅰ、血管紧张素Ⅱ、去甲肾上腺素对高血压的诊断与分型，以及评估冠心病、心力衰竭等疾病的严重程度和预后都有重要意义。

醛固酮是由肾上腺皮质球状带细胞合成和分泌的一种盐皮质素。是人体内调节血容量的激素，通过调节肾脏对钠的重吸收，维持水平衡；醛固酮的分泌主要受肾素一血管紧张素系统的调，当细胞外液容量下降时，刺激肾小球旁细胞分泌肾素，激活肾素-血管紧张素-醛固酮系统、醛固酮分泌增加，使肾脏重吸收钠增加，进而引起水重吸收增加，细胞外液容量增多；相反细胞外液容量增多时，通过上述相反的机制，使醛固酮分泌减少，肾重吸收钠水减少，细胞外液容量下降。血钠降低，血钾升高同样刺激肾上腺皮质，使醛固酮分泌增加。

目前，测定醛固酮的方法有放射性免疫法、酶联免疫法、化学发光免疫分析等，例如RIA存在放射性污染、标记物半衰期短、对操作者具有放射性损伤，且操作繁琐，时间长等缺点；而ELISA灵敏度低，检测范围窄；化学发光免疫分析（CLIA）是当今最为敏感的微量免疫测定法。

将化学发光免疫分析和磁微粒技术结合，与以微孔板为固相载体的ALD化学发光试剂盒相比，具有以下优势：（1）以磁微粒为固相载体，大大增加了抗体的有效包被量，节约了抗体的用量，从而节约了成本；（2）以磁微粒为固相载体包被抗体，增加了抗原-抗体的接触面积，及发光面积，提高了反应的灵敏度；（3）反应在液相中进行，且利用旋转磁场使磁微粒其搅拌作用，大大缩短了反应时间；（4）在反应过程中引入了生物素-亲和素系统（biotin-avidin system，BAS），它是70年代末发展起来的一种新型反应放大系统，由于具有与标记试剂高亲和力的牢固结合、多级放大效应，使其具有灵敏度高、特异性好、稳定性高的特点，目前已成为广泛用于微量抗原、抗体定性、定量检测及定位观察研究的新技术；（5）本试剂盒与管式化学发光仪配套使用，在样本测定过程中灵活性更好。但目前将化学发光免疫分析和磁微粒技术结合用于ALD检测还没有广泛用于临床。

发明内容

本发明要解决的问题是提供ALD的磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，避免了放射性免疫分析的试剂有效期短、存在放射性污染、操作繁琐等缺点，且解决了灵敏度低，检测范围窄，成本高的缺陷。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：醛固酮磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，包括：醛固酮校准品，浓度为为0，60，150，450，1500，4000pg/mL，校准品稀释液为含有50%牛血清的磷酸缓冲液；偶联有链霉亲和素的磁微粒悬浮液；生物素标记的ALD抗体；ALD酶结合物，所用的酶为辣根过氧化物酶，辣根过氧化物酶纯度RZ≥3.0，活性≥250U/mL；醛固酮质控品；化学发光液A液和B液；20倍浓缩洗液；反应管。

进一步，所述的发光液A液的主要成分为鲁米诺，B液的主要成分是过氧化脲。A液为0.7g/L鲁米诺，0.165g/L对碘酚，缓冲液为pH8.6的5mmol/L Tris·HCl，避光保存；B液为0.675g/L过氧化脲，用工艺用水配制。

进一步，所述的磁微粒是表面包裹带有氨基或羧基活性基团的四氧化三铁，粒径1-2um。

进一步，所述的醛固酮质控品包括低值质控品和高值质控品。

进一步，所述的反应管的材料是透明聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯或玻璃。

试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

（1）醛固酮校准品的配制：

将ALD纯品用含有50%牛血清的磷酸缓冲液稀释成系列梯度，浓度分别为0，60，150，450，1500，4000pg/mL。

（2）醛固酮质控品的配制：

将ALD纯品用50%牛血清的校准品稀释液配制低值质控品和高值质控品，浓度允许范围分别为196～294pg/mL和1880～2820pg/mL。

（3）磁性颗粒-链霉亲和素悬浮液的制备：