[发明专利]过氧化氢抑制IGF-1促存活功能的体外研究

权利要求书

1.过氧化氢抑制IGF-1促存活功能的体外研究，其特征在于以PC12细胞(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)为研究对象，以剥夺血清作为模型，考察IGF-1（胰岛素样生长因子-1）对PC12细胞的促存活功能，不同浓度过氧化氢预处理研究其对IGF-1促存活功能的抑制作用。

2.根据权利要求1所述的体外研究，其特征在于研究对象为PC12细胞，MTT法检测细胞存活力的细胞密度为5000-8000/孔，正常组为DMEM(基础培养基)+1.5% FBS(胎牛血清)，剥夺血清组为等量的DMEM，IGF-1给药组为12.5ng/ml、25.0ng/ml、50.0ng/ml、100.0ng/ml的IGF-1+DMEM，给药后于温度为37℃、相对湿度为95%的CO₂培养箱中继续培养24小时。

3.根据权利要求1所述的体外研究，其特征在于考察过氧化氢对IGF-1促存活功能的作用时不同浓度的H₂O₂（10μM, 30μM,100μM,200μM,400μM）预处理细胞1小时，然后再加入IGF-1，继续培养24小时后MTT法检测细胞活力。

4.根据权利要求2、3所述的体外研究方法，其特征在于用于细胞培养的基础培养基配制方法为：将一袋高糖型DMEM粉末溶于500～800 mL的超纯水，另加入5.95 g HEPES 和3.7 g NaHCO₃，磁力搅拌使干粉完全溶解，定容至1000 mL，调节pH值至7.2～7.4，无菌条件下用孔径为0.22 μm的微孔滤膜过滤除菌后分装，于4 ℃冰箱内放置储存。

5.根据权利要求2、3所述的体外研究方法，其特征在于用于检测细胞活力的MTT法配制方法如下：无菌条件下称取一定量的MTT粉末，PBS溶解至浓度为5 mg/mL，分装置-80 ℃存储备用，使用前用DMEM稀释到0.5 mg/mL。