[发明专利]OGP-AcAP5融合蛋白转基因工程菌株

说明书

技术领域

本发明涉及一种融合蛋白转基因工程菌株。

背景技术

老年人骨质疏松发病率较高，全球有2亿骨质疏松患者，并且女性多于男性。根据世界卫生组织(WHO)的标准，美国国家健康和营养调查(NHANESIII，1988～1994年)结果表明，骨质疏松严重影响老年人生活质量，50岁以上人群中，1/2的女性、1/5的男性在他们的一生中都会出现骨质疏松性骨折，一旦患者经历了第一次骨质疏松性骨折，继发性骨折的危险明显加大。中国老年人居于世界首位，现有骨质疏松症患者9000万，占总人口的7.1％。随着社会老龄化的进程，骨质疏松症的发病率呈上升趋势，预计到2050年将增加到2.21亿，那时全世界一半以上的骨质疏松性骨折将发生在亚洲，绝大部分在中国。有学者对1995～1996年美国骨质疏松、心肌梗死、卒中和乳腺癌的年发生数进行调查显示，每年发生骨质疏松性骨折150万次，其中椎体骨折70万次，腕部骨折20万次，髋部骨折30万次，其它骨折30万次。

血栓形成是一种涉及许多彼此相互作用的遗传和环境因素的多因素变化的过程。而对于老年人其凝血系统又有其特殊性，老年人纤维蛋白原(FIB)含量、组织型纤溶酶原激活物增加以及纤溶酶原激活物抑制剂复合物的增加都导致老年人的高凝状态，所以更容易形成血栓；其中研究发现绝经期后的女性的血栓发生率远高于男性。

对于老年人骨质疏松和血栓已成为常见多发病，且往往同时存在。如果患者服用多种药物同时治疗骨质疏松和血栓，容易产生药物拮抗反应；若要错开服药时间一方面要靠考虑药物的半衰期，另一方面还要考虑药物有效浓度，而且给患者造成不便。

目前缺乏一种可以同时有效治疗骨质疏松和血栓的药品。

发明内容

本发明要解决目前尚无同时有效治疗骨质疏松和血栓药品的缺陷，而提供的一种OGP-AcAP5融合蛋白转基因工程菌株。

OGP-AcAP5融合蛋白转基因工程菌株名为大肠杆菌BL21(DE3-OGP/AcAP5)，大肠杆菌BL21(DE3-OGP/AcAP5)按以下步骤制备：

一、将含有OGP-AcAP5融合蛋白基因的质粒载体pUC(OGP/AcAP5)用BamH I和EcoRI双酶切，获得OGP-AcAP5融合蛋白的DAN片段；

二、用BamHI和EcoR I双酶切质粒pGEX-6P-1；

三、OGP-AcAP5融合蛋白的DAN片段与经过双酶切的载体pGEX-6P-1进行酶连接，然后16℃放置连接过夜，得到载体pGEX-OGP/AcAP5；

四、用载体pGEX-OGP/AcAP5转化大肠杆菌BL21(DE3)，选择阳性重组子，即获得OGP-AcAP5融合蛋白转基因工程菌大肠杆菌BL21(DE3-OGP/AcAP5)。

本发明中OGP-AcAP5融合蛋白的基因序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明中OGP-AcAP5融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明OGP-AcAP5融合蛋白转基因工程菌大肠杆菌BL21(DE3-OGP/AcAP5)发酵产生的OGP-AcAP5融合蛋白含有成骨生长肽(OGP)和犬钩虫抗凝血肽(AcAP5)，共94个氨基酸，成骨生长肽和犬钩虫抗凝血肽之间用GlyThr相连接。本发明OGP-AcAP5融合蛋白转基因工程菌大肠杆菌BL21(DE3-OGP/AcAP5)发酵产生的OGP-AcAP5融合蛋白可用于同时治疗骨质疏松和血栓，适合同时患有这两种疾病的患者使用。且OGP-AcAP5融合蛋白为微生物制剂，不产生拮抗反应，使用安全。

本发明采用生物基因工程手段获得大肠杆菌BL21(DE3-OGP/AcAP5)。采用本发明基因工程菌大肠杆菌BL21(DE3-OGP/AcAP5)可大规模发酵生产OGP-AcAP5融合蛋白，具有广泛应用前景。本发明为治疗骨质疏松和血栓奠定了物质基础。

具体实施方式

本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。

具体实施方式一：本实施方式OGP-AcAP5融合蛋白转基因工程菌株名为大肠杆菌BL21(DE3-OGP/AcAP5)，大肠杆菌BL21(DE3-OGP/AcAP5)按以下步骤制备：

一、将含有OGP-AcAP5融合蛋白基因的质粒载体pUC(OGP/AcAP5)用BamH I和EcoRI双酶切，获得OGP-AcAP5融合蛋白的DAN片段；