[发明专利]钩杆菌属Tet-1及其在微生物降解胺菊酯中的应用

说明书

（一）技术领域

本发明涉及一株胺菊酯降解菌——钩杆菌属（Ancylobacter sp.）Tet-1，及其在微生物降解胺菊酯中的应用。

（二）背景技术

在过去的几十年，拟除虫菊酯类农药凭借其高效、低毒、低抗性、广谱性等众多独特的优点，跻身成为现代使用农药中最主要的成员，约占世界杀虫剂市场30%的份额。随着对有机磷杀虫剂使用的限制，拟除虫菊酯类杀虫剂的用量会越来越大。然而，很多报道已经表明，拟除虫菊酯类农药会过高的残留在蔬菜、茶叶等经济作物上，引发了一系列的食品安全问题。

胺菊酯是拟除虫菊酯的一种，属于强力合成杀虫剂，对蚊、蝇等卫生害虫具有快速击倒效果，但致死性能差，有复苏现象，因此多与其它杀虫效果好的药剂混配使用。胺菊酯以其低毒性的优势，被广泛应用在杀虫剂中，该药为世界卫生组织推荐用于公共卫生的主要杀虫剂之一。由于其结构稳定，使用后很难降解，导致会残留于环境，环境中残留的胺菊酯会通过地表泾流等作用进入水体，从而危害水生生物。

胺菊酯的化学结构和化学性质都比较稳定，若用物理、化学的方法去除，处理成本较高，且有害副产品较多，而微生物对胺菊酯的代谢具有独特的作用。用微生物代谢的方法降解胺菊酯，不仅成本低而且减少了可以有效减少二次污染，因此有着广阔的应用前景。而且，微生物是一类种类多、繁殖快、适应性强、代谢能力强的生物体。因此，若能筛选分离出能有效降解胺菊酯的微生物，对降低胺菊酯在环境中的含量，保护环境有着深远的意义。

（三）发明内容

本发明目的是提供一株新的胺菊酯降解菌——钩杆菌属（Ancylobacter sp.）Tet-1，及其在微生物降解胺菊酯中的应用。

本发明采用的技术方案是：

钩杆菌属（Ancylobacter sp.）Tet-1，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，保藏日期为2012年9月27日，保藏编号为CCTCC No：M 2012387。

本发明从农药厂的活性污泥中获得一系列菌株，经分离纯化后，得到一株能够有效降解胺菊酯的菌株，命名为Tet-1。将菌株Tet-1测得的16S rDNA序列（Genbank登陆号为JX878618）在GenBank和RDP数据库中进行BLAST比对分析，将其鉴定为Ancylobacter属（Ancylobacter sp.）。实验结果表明：Tet-1能以胺菊酯为唯一碳源生长，培养7d后，Tet-1菌株对50mg/L的胺菊酯的降解率为54.0%。目前尚无利用污泥中分离的菌株降解胺菊酯的文献报道，而本发明能高效降解解胺菊酯，利用该菌株有效降解解胺菊酯，为其在生物修复中的应用提供一定的理论基础。

本发明钩杆菌属Tet-1 （CCTCC No：M 2012387）菌株的筛选与鉴定：

1）培养基

无机盐培养液终浓度组成为：每升培养液中含有NaCl 1g，K₂HPO₄ 1.5g，KH₂PO₄ 0.5g，(NH4)₂SO₄ 1.5g，MgSO₄ 0.1g，1ml微量元素溶液，溶剂为水，自然pH值，高压蒸汽灭菌（121℃，20min）后制得，其中每升微量元素溶液中含MnSO₄·H₂O 0.13g，ZnCl₂ 0.23g，CuSO₄·H₂O 0.03g，CoCl₂·6H₂O 0.42g，Na₂MoO₄·2H₂O 0.15g，AlCl₃·6H₂O 0.05g，溶剂为水。

富集培养液：在无机盐培养液中加入胺菊酯，使得胺菊酯的终浓度为100 mg/L。

LB液体培养基：每升培养液中含有酵母粉10g，蛋白胨5.0g，氯化钠10.0g，溶剂为水，自然pH值，高压蒸汽灭菌（121℃，20min）后制得。

LB固体培养基：每升培养中含有酵母粉10g，蛋白胨5.0g，氯化钠10.0g，琼脂15.0g，溶剂为水，自然pH值，高压蒸汽灭菌（121℃，20min）后制得。

2）菌株分离纯化