[发明专利]活菌冻干粉以及三联活菌制剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及活菌冻干粉以及三联活菌制剂的制备方法，更具体涉及包含长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌和粪肠球菌的活菌冻干粉以及三联活菌制剂的制备方法。

背景技术

双岐杆菌、嗜酸乳杆菌和粪链球菌是人和动物体内常见的正常菌群重要成员，集中粘附在下肠道粘膜，对机体发挥有益作用，能抑制外籍病原菌的入侵，其代谢产物提供宿主必须的维生素，参与和协助营养的消化和吸收。上述细菌能激发机体的免疫功能。减少肠源性毒性的吸收。由于消化系统疾病或大量使用抗生素及随着年龄的增长，体内双岐杆菌逐渐减少。为保持上述有益菌的正常水平，人们开始研究含有这些有益菌的制剂。

中国专利CN101244090公开了一种双岐三联活菌制剂及其制备方法。该文献报道改进双岐杆菌、嗜酸乳杆菌和粪链球菌的种子液培养基和发酵培养基来提高双岐杆菌、嗜酸乳杆菌和粪链球菌稳定性的方法。但是发酵液活菌数及菌体活性不是不是令人很满意。

因此，需要一种具有较高活菌量、菌体活性强的发酵液来制备活菌冻干粉以及三联活菌制剂的制备方法。

发明内容

本发明的目的在于提高长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌及粪肠球菌的发酵液活菌数；提高菌的活性、提高冻干时存活率。

本发明所涉及的种液及发酵培养基使种子活性增强，发酵过程调节pH使发酵液菌体维持最佳生长状态，活菌量提高，能达到50-900亿个/mL的高密度培养（CN101244090所公开的为1-100亿个/ml），完全能够满足生产需求；本文所提供的发酵菌体产物生长状态好，活性强，在原有的冻干保护剂及冻干工艺情况下，能提高冻干制剂的活菌量及冻干存活率，延长其保存时间，提高冻干粉的稳定性。

本发明一方面提供了一种制造活菌冻干粉的方法，所述方法包括如下步骤：

（a）将菌种在种子培养基中接种，得到接种产物；

（b）将步骤（a）所得接种产物置于发酵培养基中发酵，发酵期间通过加入碱维持发酵液pH不变，得到发酵产物；

（c）混合发酵产物与保护剂冻干得到冻干菌粉；

所述菌种选自长型双歧杆菌、嗜酸乳杆菌和/或粪链球菌。

在本发明的一个优选实例中，所述碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、氨水或其组合。

在本发明的一个优选实例中，所述碱以碱的水溶液形式使用。

在本发明的一个优选实例中，所述发酵液的pH值维持在4.5-8.0的范围内。

在本发明的一个优选实例中，所述发酵液的pH值维持在6.0-7.0范围内。

本发明另一方面提供了一种制造三联活菌制剂的方法，所述方法包括以下步骤：

（i）根据本发明所述的方法分别制备长型双歧杆菌菌粉、嗜酸乳杆菌菌粉和粪链球菌菌粉；以及

（ii）混合上述长型双歧杆菌菌粉、嗜酸乳杆菌菌粉和粪链球菌菌粉得到三联活菌制剂。

本发明另一方面提供了用本发明所述的方法制备的活菌冻干粉。

本发明另一方面提供了用本发明所述的方法制备的三联活菌制剂。

具体实施方式

在本发明中，如果没有特别的说明，百分数（％）或者份都指相对于组合物的重量百分数或者重量份。

在本发明中，如果没有特别的说明，所涉及的各组分或其优选组分可以相互组合形成新的技术方案。

在本发明中，如果没有特别的说明，本文所提到的所有实施方式以及优选实施方式可以相互组合形成新的技术方案。

在本发明中，如果没有特别的说明，本文所提到的所有技术特征以及优选特征可以相互组合形成新的技术方案。

在本发明中，如果没有相反的说明，组合物中各组分的含量之和为100％。

在本发明中，如果没有相反的说明，组合物中各组分的份数之和可以为100重量份。

在本发明中，除非有其他说明，数值范围“a-b”表示a到b之间的任意实数组合的缩略表示，其中a和b都是实数。例如数值范围“0-5”表示本文中已经全部列出了“0-5”之间的全部实数，“0-5”只是这些数值组合的缩略表示。

在本发明中，除非有其他说明，整数数值范围“a-b”表示a到b之间的任意整数组合的缩略表示，其中a和b都是整数。例如整数数值范围“1-N”表示1、2……N，其中N是整数。

在本发明中，除非有其他说明，“其组合”表示所述各元件的多组分混合物，例如两种、三种、四种以及直到最大可能的多组分混合物。

如果没有特别指出，本说明书所用的术语“一种”指“至少一种”。