[发明专利]一种适用于柠檬黄的人工抗原的制备方法

权利要求书

1.一种适用于柠檬黄的人工抗原的制备方法，其特征在于以丁二酸单乙酯酰氯和2,2-二甲基-1,2-二噁烷-4,6-二酮为原料，经过4步化学反应，制得柠檬黄衍生物TAR，以TAR为半抗原用活性酯法将其与载体蛋白BSA或OVA偶联，制备柠檬黄的人工抗原，从而免疫产生针对柠檬黄的特异性抗体，用于建立酶联免疫检测方法；

（1）柠檬黄衍生物TAR的合成：TAR化学名称为1-苯基-3-丙酸-4-苯偶氮基-5-吡唑啉酮，其化学结构和合成路线如下：

（2）柠檬黄人工抗原的制备

取0.5mL的含有0.1mmol柠檬黄衍生物TAR的N,N-二甲基甲酰胺DMF水溶液，加入0.15mmol碳化二亚胺EDC和0.15mmol N-羟基琥珀酰亚胺NHS，室温避光反应3h，为A液；将0.0025mmol 牛血清白蛋白BSA或鸡卵清白蛋白OVA溶解到3mL的0.01M、pH7.4的磷酸盐PBS缓冲液中，为B液；然后将A液缓慢滴加到B液中，室温反应6h，离心去掉沉淀，取上清液即得柠檬黄人工抗原混合液；

透析袋前处理：取10cm的透析袋，于沸水中煮沸5min，再用60℃的去离子水冲洗3min， 保存在4℃去离子水中备用；

将柠檬黄人工抗原混合液移入透析袋中，用2L的0.01M的PBS缓冲液透析2次，再用2L的去离子水透析2次，合计透析3天；最后使用冻干法将透析袋中的液体制成粉末，即得到柠檬黄人工抗原。