[发明专利]双峰驼PPARγ蛋白基因、重组蛋白及其克隆方法

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，是一种双峰驼PPARγ蛋白基因、重组蛋白及其克隆方法。

背景技术

过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferatorac-tivated receptor, PPAR)因为能够使小鼠受到异种刺激后引起肝脏过氧化物酶体降低而被命名，是一种核受体，同时本身也是配体激活转录因子，属于激素核受体家族。能够被一些降脂药物和脂肪酸类物质激活，与配体结合后被激活，然后与视黄醇类受体形成二聚体，再与所调节基因上游的过氧化物酶体增物反应元件(peroxiome proliferator respon-civa alamant, PPRE)结合而发挥转录调节作用，激活某些与脂肪代谢相关的蛋白或酶基因，PPARs 调控多种在脂类代谢不同途径的基因，包括脂肪酸转运、细胞吸收、细胞内结合以及分解（β 氧化和 ω 氧化）和储存；参与脂肪细胞的生成和转化；不仅能促进前脂肪细胞的分化，而且也能促进非脂肪细胞系细胞分化成脂肪细胞，促进脂肪沉积。PPAR 基因在不同物种中存在 α，β 和 γ 3 种亚型，它们由不同的基因编码，结构、功能及在不同组织的表达量都有较大差异，其中对脂肪代谢有影响的主要是 PPARα 和 PPARγ。

PPARγ 协同 C/EBP（CCAAT）转录因子影响脂肪酸在脂肪组织中的贮存，能诱导脂肪前体细胞成熟为脂肪细胞，是脂肪细胞分化的一部分。并且，大多数 PPARγ 目的基因直接参与脂肪合成途径。PPARγ 可以激活脂肪酸转运蛋白和脂肪酸转运酶，完成脂肪酸向肝脏的转运；PPARγ 能上调长链脂肪酸基因的表达，形成酯酰辅酶 A。PPARγ 诱导小脂肪细胞的形成，调控脂蛋白脂肪酶(lipoprotein lipase, LPL)、脂肪型脂肪酸结合蛋白(adlipocyte fatty acid-binding proteins, A-FABP)、乙酰辅酶 A 合成酶(acetyl coenzyme A synzyme, ACAS)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase, FAS)与脂肪酸转运蛋白(fatty acid transport protein, FATP)等的表达，抑制瘦素(leptin)的表达，能防止高脂饮食诱导的肥胖。PPARγ 在脂肪、肌肉、肝脏等多种与胰岛素作用有关的组织中表达，激活后可调控与葡萄糖的产生、转运、利用及脂肪代谢的调节相关的基因的表达。在人 PPARγ 基因多态性研究方面，发现了 Pro12Ala 多态位点，血清载脂蛋白 B 在不同基因型个体间差异显著，该位点得到了广泛的研究，认为其与脂肪代谢异常、增强胰岛素敏感性及降低糖尿病的发生密切相关。

PPARγ在脂肪酸代谢中有着关键的调控作用,因此, 通过对PPARγ从基因、蛋白质、酶活性和抑制剂等多方面的研究, 必然会为肥胖、胰岛素抵抗综合症、糖尿病等疾病的预防和治疗带来新的希望。

双峰驼有较强的耐旱和沉积脂肪能力，尤其是在水草充足的季节，驼峰能在短时间内沉积大量脂肪，很适合进行脂类代谢研究。

发明内容

本发明提供了一种双峰驼PPARγ蛋白基因，该基因是一种影响脂肪酸在脂肪组织中的贮存和转运，能诱导脂肪前体细胞成熟为脂肪细胞，并且直接参与脂肪合成途径，与机体组织对糖的利用、胰岛素敏感性、脂质合成和能量平衡等密切相关的基因，其核苷酸序列与马的PPARγ蛋白核酸序列XM_001499929.2具有95%的相似性。

本发明的技术方案之一是通过以下措施来实现的：一种双峰驼PPARγ蛋白基因，该基因具有SEQ ID NO.1中从核苷酸第33-2276位的核苷酸序列；其同牛、人、鼠、猪PPARγ基因编码蛋白序列同源性为95.00%，编码氨基酸序列同源性为86.00%。

本发明的技术方案之二是通过以下措施来实现的：一种双峰驼PPARγ蛋白基因的重组蛋白。

下面是对上述发明技术方案之二的进一步优化或/和改进：

上述重组蛋白的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。

上述重组蛋白具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。 

上述重组蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.2。

上述重组蛋白通过设计一对引物从双峰驼PPARγ蛋白中得到双峰驼PPARγ蛋白基因，该引物对的核苷酸序列为SEQ ID NO.3 （正向）和SEQ ID NO.4（反向），序列信息如下：

SEQ ID NO.3 （正向）：5’- ATGGCGTGGGACATGTGC-3’，