[发明专利]水稻启动子p-G8及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种水稻启动子p-G8及其应用。

背景技术

水资源短缺正成为制约我国乃至世界农业发展的重要因素。我国现人均水资源占有量仅为世界人均水平的1/4，缺水已经成为我国工农业生产和人民生活面临的主要问题之一。培育耐旱品种是当前多种农作物育种工作中的重要课题。以水稻为例，水稻是我国最重要的粮食作物之一，总产量占粮食总产量40%左右，但同时又是一种需水量很大的作物，日益严峻的水资源短缺已经成为稻作生产面临的重要问题之一。在有限的水资源条件下实现水稻高产、稳产，必须培育耐旱水稻品种。研究水稻耐旱遗传学基础，加强稻属耐旱基因资源的发掘、创新和利用具有十分重要的现实意义。

普通野生稻（O.rufipogon Griff.）作为栽培稻（O.sativa L.）的祖先，是栽培稻遗传改良的重要基因库。野生稻在进化成栽培稻的过程中，不仅很多农艺性状发生了很大的变化，而且遗传多样性降低，等位基因数减少，Sun等研究表明栽培稻中的等位基因仅为野生稻的60％。

被誉为“植物大熊猫”的江西东乡野生稻（O.rufipogon Griff.）是目前世界上生境最北（28°14′N）的野生稻，与栽培稻隔离条件好，没有栽培稻基因渗入，具有耐低温、耐干旱的特性。从野生稻中发掘、定位、克隆耐旱相关基因，将对水稻生产具有重要意义。

我国野生稻资源丰富，从野生稻中发掘、定位、克隆耐旱相关基因及其旱诱导启动子，将对水稻生产具有重要意义。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种DNA片段。

本发明提供的DNA片段，为如下1）或2）或3）的DNA分子：

1）序列表中序列1所示的DNA分子；

2）在严格条件下与1）限定的DNA序列杂交且具有启动子功能的DNA分子；

3）与1）限定的DNA序列具有90%以上同源性，且具有启动子功能的DNA分子。

上述严格条件可为在0.1×SSPE（或0.1×SSC）、0.1％SDS的溶液中，65℃条件下杂交并洗膜。

序列表中序列1的DNA序列由1830个核苷酸组成，含有ABRE作用元件。

含有上述DNA片段的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌也是本发明保护的范围。

上述重组载体为将上述DNA片段插入表达载体中，得到重组载体；具体为将序列表中的序列1所示的DNA片段插入pCambia1381的EcoRI和HindIII酶切识别位点间得到的重组质粒。

扩增上述DNA片段的全长或其任意片段的引物对也是本发明保护的范围。

上述引物对中由序列表中序列2所示的单链DNA分子和序列表中序列3所示的单链DNA分子组成。

上述DNA片段在启动目的基因表达中的应用也是本发明保护的范围。

上述应用中，所述目的基因表达为组织特异表达。

上述应用中，所述组织为植物的小穗、颖壳和枝梗中的至少一种。

上述应用中，所述植物为单子叶植物或双子叶植物；所述单子叶植物具体为水稻。

上述应用中，所述目的基因为GUS基因。

本发明的实验证明，本发明发现一种启动子，含有ABRE逆境响应元件，将导入水稻，在水稻中驱动GUS基因的表达，结果表明，在水稻小穗、颖壳和枝梗中特异表达，该启动子为组织特异性启动子；本发明在农业领域将具有广阔的应用和市场前景。

附图说明

图1为基因在30%PEG处理前（0）和处理2、4、8、16、24、36、48和72小时后的表达谱

图2为以IL23基因组DNA为模板，在引物GUS8引导下的PCR扩增产物

图3为p-G8转基因水稻的GUS组织染色及基因G8在不同组织中的相对表达量分析

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。所用引物合成及测序工作均由北京奥科生物科技有限责任公司完成。