[发明专利]一种三倍体石斑鱼的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于鱼类遗传育种领域，具体涉及一种三倍体石斑鱼的制备方法。

背景技术

石斑鱼类隶属鲈形目(Perciformes)，鮨科(Serranidae)，石斑鱼亚科（Epinephelinae），是闻名世界的名贵鱼类，其营养丰富，是一种含低脂肪、高蛋白的上等食用鱼，深受广大消费者喜爱。在我国南方沿海广东、海南、福建、广西等地石斑鱼已成为海水养殖的主要对象，经济价值巨大。

三倍体是指具有三套染色体组的个体，正常的个体只具有两套染色体组。三倍体个体生殖原细胞在减数分裂过程中不能正常的联会，不能产生正常的配子，在三倍体个体发育过程中，性腺的不正常发育节省了生殖能量并将这部分能量用于生长发育，再加上三倍体个体比二倍体多了一套染色体组，基因表达更加活跃加快了生长发育的进程，使得三倍体在生长发育速度方面具有非常明显的优势，具有巨大的应用价值。

目前，传统石斑鱼的育种方法育种工作年限长、育种工作进展缓慢且石斑鱼杂交育种模式中杂交二倍体容易发生逃逸，从而对海洋生态环境造成无法预估的严重后果。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种三倍体石斑鱼的制备方法，该制备方法育种周期短、生长速度快、对海洋生态环境无影响。

本发明的上述技术问题是通过如下技术方案来实现的：一种三倍体石斑鱼的制备方法，包括以下步骤：挑选遗传距离为0.140-0.145亲缘关系的不同种石斑鱼作为亲鱼，采用干法人工受精进行远缘杂交，卵子受精后转移到海水中进行冷休克处理，育苗经起捕、驯养后鉴定出三倍体石斑鱼即可。

本发明通过远缘杂交配合物理刺激产生出三倍体石斑鱼，大大加快了石斑鱼多倍体育种工作的进程。

本发明所述的石斑鱼优选鞍带石斑鱼（E.lanceolatus）和斜带石斑鱼（E.coioides）。

本发明优选采用干法人工受精进行远缘杂交时的温度为25~28℃。

本发明在卵子受精后转移到海水中进行冷休克处理，冷休克处理时的温度优选为4℃，冷休克处理时间优选为20~25min。

本发明育苗经起捕、驯养长至8~9个月龄后鉴定出三倍体石斑鱼即可。

本发明育苗经起捕、驯养后采用倍性分析仪检测血细胞倍性，并进行染色体核型分析以及血细胞大小测量从而鉴定出三倍体石斑鱼。

可以采用血细胞涂片法测量血细胞大小。

与现有技术相比，本发明具有如下优点：

(1)本发明挑选遗传距离为0.140-0.145亲缘关系的不同种石斑鱼作为亲鱼，在杂交后进行冷处理，可以得到三倍体石斑鱼。本发明操作简单，制备出的三倍体石斑鱼生长速度快，不能繁殖，对海洋生态环境无影响；

(2)本发明加快了石斑鱼类遗传育种研究的进程，为以后的海水鱼类多倍体遗传育种研究提供重要依据；在生产应用方面具有巨大的经济价值；在石斑鱼类遗传育种、遗传进化以及内分泌调控等理论研究方面都具有重大的参考价值。

附图说明

图1-2是实施例1中的染色体图进行核型分析结果图。

具体实施方式

以下各实施例中所采用的试剂，如无特殊说明，均为市售。

实施例1

通过PCR扩增出中国近海石斑鱼5种石斑鱼线粒体细胞色素b（Cyt b）基因，利用MEGA3.1软件并根据Kimura双参数模型计算遗传距离。石斑鱼具体种类如下：赤点石斑鱼（E.akaara）、褐点石斑鱼（E.fuscoguttatus）、鞍带石斑鱼（E.lanceolatus）、斜带石斑鱼（E.coioides）和豹纹鳃棘鲈（P.leopardus）。挑选健康石斑鱼作为杂交亲鱼。

表1PCR扩增石斑鱼线粒体细胞色素b（Cyt b）基因引物序列如下

表2十三种石斑鱼类种间的遗传距离

繁殖期前1~2个月，挑选色泽鲜艳、体表无损伤、鳃丝鲜红无寄生虫、健康的的雌性斜带石斑鱼和雄性鞍带石斑鱼作为亲鱼，遗传距离为0.14419，专池投喂精细饵料为亲鱼提供优良的营养，增强亲鱼的体质以便得到质量好的配子，期间密切注意亲鱼池中水的温度和盐度，注意亲鱼的摄食及生活状态以便保持亲鱼在最佳的状态进入繁殖期。