[发明专利]干涉片段及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及干涉片段及其应用，具体地，本发明涉及干涉片段及其应用。更具体地，本发明涉及干涉片段及其在抑制肝癌细胞增殖及转移中的用途、抑制肝癌细胞增殖及转移的方法。

背景技术

原发性肝细胞癌（HCC）是世界范围内发病率很高的恶性肿瘤之一，其死亡率在恶性肿瘤死亡顺位中居第三位，全球每年HCC死亡病例数高达600，000。而现阶段的研究表明，通过分子生物技术手段抑制肝癌细胞增殖及转移，将是未来肝癌治疗的主要方向之一。

然而，目前通过分子生物技术手段抑制肝癌细胞增殖及转移的研究仍有待改进。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种能够用于抑制肝癌细胞增殖及转移的干涉片段。

需要说明的是，本发明是基于申请人的下列发现而完成的：

近年来的研究表明，与肝癌密不可分的肿瘤微环境在肝癌的进展过程中起着重要作用。肝癌肿瘤微环境由多种基质细胞组成，包括间充质干细胞（MSC）、肝星状细胞(hepatic stellatecell，HSC)、内皮细胞、成纤维细胞、肌成纤维细胞、脂肪细胞、巨噬细胞、炎症细胞等，它们能够分泌大量的生长因子、细胞因子、基质金属降解酶等，参与肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移及耐药等。其中MSC是肿瘤微环境的重要组成部分，由于其具有很强的多向分化能力、参与免疫调节和免疫抑制、能够分泌多种活性因子参与肿瘤的发生发展，在肿瘤微环境中的重要作用逐渐被人们所认识，MSC与肿瘤细胞的相互作用已成为研究肿瘤微环境和肿瘤关系的重要模型之一。血液系统肿瘤MSC与肿瘤细胞的相互作用已经很深入，然而在实体瘤中，分离和培养肿瘤组织MSC的难度比较大，使得实体瘤组织MSC的报道很少。而有关肿瘤细胞与MSC相互作用的研究，人们主要利用建系的永生化的MSC或正常的人骨髓BM-MSC来研究MSC与肿瘤的相互作用，但不同研究者发现骨髓MSC对肿瘤的增殖和转移的效应有些矛盾，促进、抑制、无效应的研究均有报道。由于骨髓MSC主要定位于骨髓腔，在体内生理条件下与肝癌细胞并不接触，尽管在肿瘤病理及损伤中，一小部分骨髓MSC能够迁移到肿瘤部位及损伤部位，但数量非常有限。而肿瘤组织中的定位于血管周部位的MSC与肿瘤细胞在体内相互作用、共同发育，在肿瘤细胞的刺激下，MSC反过来能够分泌更多的促肿瘤发生发展的活性因子来刺激肿瘤增殖及转移。相比正常的骨髓MSC，肿瘤组织MSC与肿瘤细胞的相互作用可能是更好的反映肿瘤微环境与肿瘤细胞发生发展的模型，因此明确肿瘤组织MSC与肿瘤的相互关系和分子机制，可预期为肿瘤的微环境干预提供新的思路和靶点的选择。然而到目前为止，实体瘤组织中的MSC研究（包括肝癌）仍然远远落后于血液系统肿瘤MSC的研究。并且，截至目前，尚无从肝癌组织分离MSC的报道，肝癌MSC与肝癌细胞的相互作用关系仍然未知。

在以上的背景下，发明人从肝癌组织及癌旁组织中成功分离并扩增MSC，通过增殖状态，表型分析，具有向脂肪、成骨细胞分化能力等方面确定其符合MSC的基本特征。接着，发明人通过肝癌MSC与肿瘤细胞共移植（皮下成瘤、肝内注射），发现肝癌MSC能够显著促进肿瘤体内增殖及肝内转移。

进一步，发明人利用Agilent人全基因组表达谱芯片对肝癌组织MSC与肝癌旁组织MSC进行基因表达分析（委托上海伯豪生物技术有限公司进行），结果发现肝癌组织MSC高表达S100A4，而S100A4高表达能够显著促进肝癌的增殖及转移。

综上，发明人发现，S100A4能够促进肝癌增殖及转移。由此，发明人提出了一种能够通过干涉S100A4的表达而抑制肝癌细胞增殖及转移的干涉片段。

根据本发明的一个方面，本发明提出了一种干涉片段。根据本发明的实施例，该干涉片段的正义链和反义链分别具有SEQ ID NO：1~2所示的核苷酸序列，即其正义链为：CGU GCUUGAUGC UGAGCAA（SEQ ID NO：1），反义链为UUG CUCAGCAUCAAG CACG（SEQIDNO：2）。发明人惊奇地发现，将本发明的干涉片段转入肝癌细胞后，能够显著地下调肝癌细胞中S100A4的表达，进而能够下调肝癌细胞中基质金属蛋白酶MMP9的表达，从而能够抑制肝癌细胞的增殖及转移。

根据本发明的另一方面，本发明还提出了上述干涉片段在抑制肝癌细胞增殖及转移中的用途。根据本发明的实施例，利用本发明的干涉片段下调肝癌细胞中S100A4的表达，从而抑制肝癌细胞增殖及转移。由此，能够有效地实现本发明的干涉片段在抑制肝癌细胞增殖及转移中的用途。