[发明专利]油田水样中硝酸盐还原-硫离子氧化细菌NR-SOB的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物检测技术领域，特别是涉及一种油田水样中硝酸盐还原-硫离子氧化细菌NR-SOB的检测方法。

背景技术

目前，在微生物治理油藏硫化氢过程中，一般关注硝酸盐还原菌，利用生物竞争抑制原理，来消除油藏生物成因的硫化氢。随着科技的发展，发现有些油藏含有硫元素代谢相关的其他微生物，如NR-SOB菌，NR-SOB属于一种厌氧微生物，其功能为还原硝酸盐的同时氧化硫离子，故其不仅能消除生物成因的硫化氢，亦能对非生物成因硫化氢进行消除。但其存在培养条件中对氧气含量要求比较苛刻，不解决NR-SOB菌的检测问题就无法解决优化油藏硫化氢治理剂等技术问题。

发明内容

本发明为解决公知技术中存在的技术问题而提供一种油田水样中硝酸盐还原-硫离子氧化细菌NR-SOB的检测方法。

本发明的目的是提供一种具有操作简单，配制方便，测试便捷，数据准确，可靠性强，经济实用，快速准确，方便用于油田微生物的检测等特点的油田水样中硝酸盐还原-硫离子氧化细菌NR-SOB的检测方法。

本发明油田水样中硝酸盐还原-硫离子氧化细菌NR-SOB的检测方法为解决公知技术中存在的技术问题所采取的技术方案是：

油田水样中硝酸盐还原-硫离子氧化细菌NR-SOB的检测方法，其特点是：检测方包括以下步骤：

1）材料清洗

将玻璃器皿、橡胶塞和铝箔盖清洗干净，空干残水，待用；

2）培养基配制

配制NR-SOB测试培养基：R-SOB培养基中包括组份及其含量：NaHCO₃ 1.6-2.1g/L，乙酸钠0.6－0.8g/L，KNO₃ 0.8－1.2g/L，NH₄Cl 0.01－0.03g/L，（NH₄）₂SO₄ 0.1－0.2g/L，KH₂PO₄ 0.5-0.7g/L，Na₂HPO₄ 0.6-0.8g/L，NaCl 6-8g/L，CaCl₂·2H₂O 0.2－0.4g/L，MgSO₄·7H₂O 0.7－0.9g/L，FeCl₃ 0.0002-0.0003g/L，刃天青0.0005-0.002g/L，半胱氨酸盐酸盐0.4－0.6g/L，微量营养液0.5mL；

微量营养液组成：MnSO₄·H₂O 2－3g/L，ZnSO₄·7H₂O 0.4－0.6g/L，CuSO₄·5H₂O 0.02－0.03g/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.02－0.03g/L，CoCl₂·6H₂O 0.04－0.05g/L，H₂SO₄0.4-0.6mL/L；

3）灭菌

将配制的NR-SOB测试培养基装于器皿中，纱布封口，用蒸汽灭菌锅灭菌；

4）除氧、加硫、分装

除氧：将灭菌后的培养基置于厌氧工作站中，除氧1h，直至培养基颜色由粉色变为无色；

加硫：1M Na₂S·9H₂O母液用0.22μm滤膜过滤除菌，加入培养基中，使S^2-终浓度为80ppm；

分装：用移液器以9mL/瓶的量装进洗净的玻璃瓶内，盖上橡胶塞和铝箔盖，再用压盖器将其压紧密封；

5）NR-SOB菌检测

测定待测水样中的NR-SOB菌的菌数时，采用绝迹稀释法，将待测水样置于厌氧工作站中，平衡至不含氧气，用无菌注射器逐级注入测试瓶中稀释培养，直到最后一个测试瓶无菌生长为止，根据稀释的倍数计算出待测水样中细菌的数目。

本发明油田水样中硝酸盐还原-硫离子氧化细菌NR-SOB的检测方法还可以采取如下技术方案：

油田水样中硝酸盐还原所述的油田水样中硝酸盐还原-硫离子氧化细菌NR-SOB的检测方法，其特点是：NR-SOB测试培养基加入NaOH调节溶液pH值7.0-7.5。