[发明专利]一种杉木组织培养外植体获取方法

说明书

技术领域：

本发明属于生物技术领域，涉及一种杉木组织培养外植体获取方法。

背景技术：

杉木（Cunninghamia lanceolata）是我国特有的针叶用材树种，也是我国华南地区重要的速生用材树种之一，在广西、广东、云南、重庆、四川、福建、江西、浙江、江苏、安徽、河南等地均有分布。杉木材质好、易加工，是中国南方首要的商品用材，可广泛用于桥梁、建筑、家具、门窗、板料、电杆、造纸等。近年来，随着国家和地方对林业的高度重视以及科技水平和经营水平的不断提高，杉木育苗方式正从传统的播种育苗向无性快繁育苗转变。目前，虽然一些杉木重要产区已成功利用组培快繁技术对选育出的优良家系进行了育苗并造林，但是，优良的外植体材料获取仍是制约杉木组织培养顺利进行的关键问题。在当前的杉木组织培养过程中，外植体材料通常使用大树穗条和基部萌条、离体胚、无菌实生苗、子叶和针叶。大树基部萌条是杉木组织培养中最常用的外植体材料，但由于大树多数位于偏远林区，采摘不便、萌芽难、数量少且难以灭菌，因此大树萌条难以满足实际生产育苗需求；离体胚、无菌实生苗、子叶和针叶作为外植体材料，获取不定芽的速度和数量不及茎段快和多，难以作为组织培养的常用材料。而利用苗圃实生苗萌条作为杉木组织培养的外植体材料，既方便管理，易于控制数量和质量，又方便采摘，易于灭菌，总体上克服了其他取材方式的缺点，目前采用该技术方案的相关专利和文献未见报道。

发明内容：

本发明的目的为克服已有杉木组织培养外植体获取技术的不足，获取质量好、数量多、易灭菌和方便采摘的萌条，满足杉木组织培养快速繁殖体系建立的需要而提供一种杉木组织培养外植体获取方法。

本发明的技术方案是： 

一种杉木组织培养外植体获取方法，利用苗期苗木优劣性表现，在优良家系基础上再次挑选优质苗木，同时利用杉木萌芽性强的特点和苗圃方便的管理条件，通过幼年实生苗修剪、施肥、促萌，获取优质萌条作为杉木组织培养的外植体材料，其获取方法包括选种与播种，芽苗移植与管理，母株种植与管理，外植体获取操作工序，具体操作步骤如下：

（1）选种与播种：选取无病虫害、颗粒饱满的杉木优良家系种子经催芽处理后播种；

（2）芽苗移植与管理：芽苗出土后移植到小容器杯内，视情况淋水、喷药、施肥； 

（3）母株种植与管理：当步骤（2）移植苗木生根稳定后，移栽到中容器杯内，搭建荫棚，挑选壮苗作母株种植，定时追肥，加强病虫害防治；

（4）外植体获取：剪取萌芽条，修剪针叶，进行消毒接种。

以上所述的选种与播种方法是：用0.3～0.5 %高锰酸钾溶液消毒10～20 min后，捞出种子用25～35 ℃温水浸泡24 h，捞出种子滴干水后置于25～30 ℃恒温箱催芽3～4天，待部分种子露白时播种于已消毒的沙床上。 

以上所述的芽苗移植与管理方法是：当芽苗高3～5 cm时移植到小容器杯内，小容器杯为宽×高为8～12 cm×10～14 cm的无底无纺布网袋，营养土为经堆沤的轻基质；芽苗移植后盖遮阴网，保持土壤湿润，每隔14～20天施一次0.3～0.6 %复合肥水液，1个月后芽苗生根稳定。 

以上所述的母株种植与管理方法是：当苗木生长8～15个月时，选取苗高20～60 cm，地径0.2～0.6 cm，主干通直，侧枝少的容器苗作母株，种植到底径为15～20 cm，口径为20～30 cm，高为20～30 cm，底部有一个直径0.5～1.0 cm孔洞的塑料中容器杯的种植基质中，用遮阴度为40～60%的遮阴网搭建高1.8～2.5 m的荫棚，每隔7～15天施肥一次，0.3～0.5%硝酸铵溶液和0.5～1%复合肥溶液交替施用；当母株种植15～30天后，于距离地面10～25 cm处截断主干。 

以上所述的种植基质的成分和重量比是：红心土∶木糠∶蛭石∶鸡粪为50～60∶30～40∶3～5∶5～10。 

以上所述的外植体获取方法是：剪取长4～10 cm，直径0.15～0.40 cm的萌芽条，剪除针叶，于超净工作台上对萌芽条进行消毒，然后于萌芽条顶部0.5～1.0 cm处剪除顶芽，余下部分从上往下修剪成1.0～3.0 cm长的茎段作外植体进行不定芽诱导，每根萌芽条取1～3个茎段。 

本发明优点及积极效果：