[发明专利]一种红花药材高效液相色谱指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱

说明书

技术领域

本发明涉及中药材指纹图谱的建立方法，尤其是红花药材高效液相色谱(HPLC)指纹图谱的建立方法，以及由此方法所得到的红花药材标准指纹图谱，属于药物分析技术领域。

背景技术

红花为菊科植物红花的花。红花为一年生草本，我国东北、华北、西北及山东、浙江、贵州、四川、西藏等地广泛栽培。红花性温，味辛，活血通经、散瘀止痛。用于经闭、痛经、恶露不行、症瘕痞块、跌打损伤。古人常有於血在体内时，常加红花一小把。纱布包煮开可用一天两次泡脚，适用各种静脉曲张，末梢神经炎，血液循环不好，腿脚麻木或青紫等淤血症。红花中成分比较复杂，含有红色的和黄色的色素：红花甙、前红花甙、红花黄色素A及B、红花明甙A。又含多酚类成分：绿原酸、加啡酸、儿茶酚、焦性儿茶酚、多巴。还含挥发性成分八十余种，以及红花多糖等。由于受产地、气候和生态环境等的影响，不同红花药材所含的成分也存在着一定差异。《中国药典》对红花药材的质量控制仅限于红花黄色素A和山奈素含量的测定，不能系统、完整地反映红花的内在质量。要控制红花及其成方制剂功效，就不能只针对其中1、2个化学成分，必须对它的物质群整体予以控制。

中药指纹图谱特指中药材或中成药经光谱或色谱等现代分析技术得到的中药各组分群体共有特征的图谱或图象。目前指纹图谱已成为国内外公认的鉴别中药品种和评价中药质量的最有效手段之一。

中药指纹图谱经过了数十年的研究，使用了包括紫外、红外、气相、高效液相、薄层、核磁共振、扫描电子显微镜、计算机图像分析、电泳技术、同功酶分析法、分子生物学技术、聚类分析技术等许多现代分析测试手段，为中药的物质鉴定和成分分析积累了大量的数据。但从中药全面质量控制的角度看，还远未达到有效地反映和控制中药的整体质量的目的。高效液相色谱(HPLC)指纹图谱在国际上容易获得认可，包括美国、英国、法国、加拿大、德国、日本和印度在内的许多国家更愿意接受HPLC指纹图谱。而且，目前还没有红花药材的指纹图谱。

现有的红花药材质量控制方法，存在质量控制技术的不足的缺陷。

发明内容

本发明的目的是提供一种红花药材指纹图谱的建立方法。

本发明的一种红花药材高效液相色谱指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：

一、供试品溶液的制备：称取红花药材粉末，置于具塞容器中，按质量体积比为1g：100~300mL的比例将红花药材粉末与水混合均匀，在室温条件下，超声震荡45min，取上清液用微孔滤膜过滤，收集滤液作为供试品溶液；

二、指纹图谱的制作：将步骤一得到的供试品溶液注入高效液相色谱仪，以质量百分含量为0.2％磷酸水溶液为A相，乙腈为B相进行梯度洗脱；

其中，高效液相色谱条件为：

色谱柱填料Phenomenex C18，规格为250×4.6mm，5μm；柱温为25℃~35℃；流动相为B相乙腈和A相质量百分含量为0.1～0.2％磷酸水溶液，流速0.8~1.2mL/min，检测波长370nm，进样量20μL；

在此条件下分析供试品溶液，得到红花药材的指纹图谱。

本发明采用红花药材高效液相色谱指纹图谱的建立方法得到的红花药材的指纹图谱。

本发明包含以下有益效果：

(1)将红花药材作为一个整体对待，通过比较其共有峰可以找出不同药材之间的细微差异；

(2)供试品制作简便，色谱条件容易实现；

(3)方法的稳定性和重现性都比较好；

(4)适于对红花药材真伪、产地和品质的鉴别和控制，弥补了现有质量控制技术的不足，使红花药材的质量控制更加完善和科学。

附图说明

图1为本发明提供的红花药材的标准指纹图谱；其中，1至10为红花药材共有特征峰。

具体实施方式

本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。

具体实施方式一：本实施方式的一种红花药材高效液相色谱指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：

一、供试品溶液的制备：称取红花药材粉末，置于具塞容器中，按质量体积比为1g：100~300mL的比例将红花药材粉末与水混合均匀，在室温条件下，超声震荡45min，取上清液用微孔滤膜过滤，收集滤液作为供试品溶液；

二、指纹图谱的制作：将步骤一得到的供试品溶液注入高效液相色谱仪，以质量百分含量为0.2％磷酸水溶液为A相，乙腈为B相进行梯度洗脱；

其中，高效液相色谱条件为：