[发明专利]具核素成像、荧光成像与磁共振成像功能的载药纳米粒及其制法和用途

权利要求书

1.一种具核素成像、荧光成像与磁共振成像功能的载药纳米粒，粒径为80-250nm，其特征是：它是由大分子单体和丙烯酸的共聚物包裹的氧化铁磁流体的复合纳米微粒表面标记有近红外荧光染料和核素分子后进行交联，最后进行载药的具核素成像、荧光成像与磁共振成像功能的载药纳米粒，所述的大分子单体是壳聚糖、明胶、纤维素或酪蛋白。

2.根据权利要求1所述的载药纳米粒，其特征是：所述的氧化铁磁流体是柠檬酸、聚乙烯醇、聚乙二醇或聚乙烯吡咯烷酮包裹的氧化铁纳米微粒，流体动力学半径为5～20nm。

3.根据权利要求1所述的载药纳米粒，其特征是：所述的壳聚糖是脱乙酰度为80-95%的数均分子量为1-20万的壳聚糖。

4.根据权利要求1所述的载药纳米粒，其特征是：所述的荧光染料是Cy5.5-NHS染料或异硫氰酸NIR-797染料。

5.根据权利要求1所述的载药纳米粒，其特征是：所述的标记有核素分子是标记有^99mTc或⁶⁴Cu。

6.根据权利要求1所述的载药纳米粒，其特征是：所述的载药是载有顺铂药物。

7.一种制备权利要求1所述载药纳米粒的方法，其特征是它包括如下步骤：

步骤1. 表面修饰的氧化铁纳米微粒的磁流体：通过共沉淀法、水热法或热分解法制备的柠檬酸、聚乙烯醇、聚乙二醇或聚乙烯吡咯烷酮包裹的氧化铁纳米微粒，流体动力学半径5～20nm，得到产物；

步骤2. 大分子-单体对与表面修饰的氧化铁纳米微粒共聚合制备包裹有氧化铁的复合纳米微粒：将大分子单体壳聚糖、明胶、纤维素或酪蛋白溶于含有聚丙烯酸水溶液中，当体系变为均相且澄清透明后，在超声条件下加入计量的步骤1制备的磁流体，于氮气气氛下升温至70-90℃，然后加入1%的K₂S₂O₈溶液引发丙烯酸的聚合，反应结束后，得到带有浅蓝色乳光的溶液，经过滤后在截留分子量为12 kDa的透析袋中用蒸馏水透析24 h以除去剩余的单体和引发剂；

步骤3. 复合纳米微粒表面标记近红外荧光分子：

方法一：由步骤2制得的纳米微粒分散在浓度为50 mM、pH 8.5的硼酸盐缓冲溶液中 ， 通过PD-10 column色谱柱，荧光染料Cy5.5-NHS溶解在二甲亚砜中，与Cy5.5-NHS的摩尔比为5:1，避光反应30分钟；

方法二：由步骤2制得的纳米微粒分散在浓度为50 mM、pH 8.5的硼酸盐缓冲溶液中 ， 通过PD-10 column色谱柱，然后将异硫氰酸NIR-797溶于二甲亚砜中，使其浓度为10 mg/mL，取0.1 mL染料溶液缓慢滴入2 mL调整过pH值（8.5）的纳米微球溶液中，在37℃避光反应搅拌2 h，然后将溶液通过PD-10 column色谱柱纯化纳米微球；

步骤4. 复合纳米微粒表面标记核素分子：

方法一：将二乙烯三胺五乙酸二酐（DTPA）溶于DMSO中，使其浓度为20 mg/mL，二乙烯三胺五乙酸二酐与表面修饰的氧化铁纳米微粒摩尔比为5:1, 避光反应过夜，然后将上述溶液通过PD-10 色谱柱, 并分散在pH= 7.4的PBS 缓冲溶液中，纳米微球的放射性核素标记的方法如下：将氯化锡和^99mTcO4￣加入到标记了二乙烯三胺五乙酸二酐的纳米微球的浓度为0.1 mol/L、pH=7.4的 PBS溶液中，在室温下搅拌30 min，然后，将^99mTc-DTPA-纳米粒子通过0.2μm注滤头过滤，来纯化得到的^99mTc标记的载药纳米微球；

方法二：将偶联剂l，4，7,10-四氮杂环十二烷四乙酸（DOTA-NHS）溶解在DMSO中，DOTA与表面修饰的氧化铁纳米微粒摩尔比为5:1, 避光反应过夜，然后将上述溶液通过PD-10 色谱柱, 并分散在pH 7.4的PBS 缓冲溶液中，将⁶⁴CuCl₂(2 mCi)盐酸溶液加入到标记了DOTA的纳米微球的浓度为0.1 mol/L、pH=7.4的PBS溶液中，在室温下搅拌30 min，然后，将⁶⁴Cu-DOTA-纳米粒子通过0.2μm注滤头过滤，来纯化得到的⁶⁴Cu标记的载药纳米微球；

步骤5. 标记有核素分子和近红外荧光分子的复合纳米微粒的药物负载：在双标记的复合纳米微球溶液中加入计算量的1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐和2，2'-（乙烯二氧）双（乙胺）进行交联反应，在室温的条件下搅拌10 h后，将溶液放入截留分子量为12 kDa的透析袋中用蒸馏水透析24 h以除去未反应的交联剂，然后将计算量的顺铂加入到交联后的复合纳米微球溶液中，使药物浓度为1 mg/mL，并将其放入37℃摇床中搅拌2天，然后根据kataoka课题组的方法来除去没有负载上的游离的顺铂，得到具核素成像、荧光成像与磁共振成像功能的载药纳米粒。

8.权利要求1所述的具核素成像、荧光成像与磁共振成像功能的载药纳米粒在制备抗肿瘤药物中的应用。