[发明专利]一种α-氨基酸酯水解酶固定化方法

权利要求书

1.一种α-氨基酸酯水解酶固定化方法，按如下步骤进行：

（1）发酵含有重组质粒pET28a-aeh的大肠杆菌BL21(DE3)，离心分离获得菌体；

（2）将菌体用溶菌酶、DNA酶和RNA酶处理，离心分离获得无细胞裂解液；

（3）通过盐析初步去除沉淀杂蛋白和沉淀目的蛋白；

（4）将所获得粗酶和处理后的载体按照一定的比例加入含有盐的溶液中，控制体系的温度和pH，进行固定化反应，反应一定时间后，取出用去离子水洗涤至洗涤流出液无酶活力，抽滤去水，获得固定化的α-氨基酸酯水解酶。

2.如权利要求1所述的固定化方法，其特征在于，盐析操作中使用的盐为硫酸铵，其质量百分比浓度为从10%-50%。

3.如权利要求1所述的固定化方法，其特征在于，细胞裂解液为大肠杆菌细胞经过溶菌酶处理后经低温高速离心后所得的上清液。

4.如权利要求1所述的固定化方法，其特征在于，所使用的载体为含有环氧基活性基团的圆珠状聚合物，其粒径为150μm---300μm，环氧官能团容量不低于50μmol/g，含水量40-70%。

5.如权利要求1所述的固定化方法，其特征在于，其固定化反应温度为10℃---35℃，固定化反应搅拌速度为100r/min--300r/min。

6.如权利要求5所述的固定化方法，其特征在于，其固定化反应温度为10℃-25℃，固定化反应搅拌速度为150 r/min-230 r/min。

7.如权利要求1所述的固定化方法，其特征在于，固定化反应在一定浓度的盐溶液中进行，所用的盐包括阴离子为硫酸根、硝酸根、氯离子、乙酸根、碳酸根、碳酸氢根、磷酸根、磷酸一氢根、磷酸二氢根；阳离子包括铵离子、 钾离子、钠离子、镁离子、钙离子、铝离子。

8.如权利要求7所述的固定化方法，其特征在于，所用的盐浓度0.1mol/L---2.5mol/L。

9.如权利要求1所述的固定化方法，其特征在于，固定化反应体系酶与载体的比例按照QE值范围为100---1000加入，QE值为200---800，固定化反应体系的pH为5.0---9.0。

10.如权利要求9所述的固定化方法，其特征在于，固定化反应体系酶与载体的QE值为300---700，固定化反应体系的pH为6.0—7.0。