[发明专利]一种分步酶解提取浒苔多糖的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种浒苔多糖的提取方法，尤其是涉及一种分步酶解提取浒苔多糖的方法。

背景技术

浒苔(Enteromorpha)是一种大型绿藻，俗称苔条、青海苔等，为绿藻门石莼目石莼科浒苔属的藻类植物，生长在潮间带。在中国，浒苔产量很高，尤其是东部沿海。近年来，浒苔的快速繁殖对我国沿海造成污染，为治理浒苔过度繁殖造成的污染，需要耗费大量的人力物力，因此如能对浒苔进行开发利用，不但可治理浒苔污染，同时还能够变废为宝。

自古以来浒苔即为食用和药用藻类，在《本草纲目》中记载浒苔可“烧末吹鼻止衄血；汤浸捣敷手背肿痛”；《隐身居饮食谱》记载：“清胆，消瘰疬瘿瘤，泻胀、化痰，治水土不服。浒苔富含糖类、蛋白质、粗纤维及矿物质，同时还含有脂肪和维生素。近年来的研究证实，浒苔的主要成分水溶性多糖是药理活性很强的成分，具有显著的降血脂、抗疲劳、抗菌、抗肿瘤及增强免疫力等多种生物学活性(林文庭.浅谈浒苔的开发与利用.中国食物与营养，2007，9：23～25)

目前浒苔多糖的提取最常用的是热水浸提法(吕玲玲.浒苔水溶性多糖提取工艺的优化研究.安徽农业科学，2009，37(24)：717，756.)，如申请号为201010224578.7的专利申请所述。但是采用热水浸提法从浒苔中提取多糖的收率较低、杂质含量高，耗能高，活性低。

发明内容

本发明就是针对上述问题，提供了一种产率高、产品纯度高、耗能低、无污染且保留较高生物学活性的浒苔多糖的提取方法。

本发明技术方案所采用的生产工艺过程为：浒苔藻体的除杂、干燥、粉碎——分步酶解——酶的灭活——离心、浓缩、乙醇沉淀——真空干燥。

具体步骤如下：

步骤1：将浒苔清洗干净，60～80℃烘干后粉碎、过筛(20～60目)。称取所得浒苔粉末，按料液比1∶20～60(w/v，g/ml)加入蒸馏水，充分搅拌，浸泡10～15h，得浒苔第一浸提液。

步骤2：向所述浒苔第一浸提液加入酸调节pH值为3.5～4.5，将温度加热至40～50℃，加入果胶酶，充分搅拌，酶解1～2h，得浒苔第二浸提液。

步骤3：向所述浒苔第二浸提液加入碱调节pH值为4.5～5.5，将温度加热至50～60℃，加入纤维素酶，充分搅拌，酶解2～4h，得浒苔第三浸提液。

步骤4：向所述浒苔第三浸提液中加入木瓜蛋白酶，在温度50～60℃、pH值为5.0～6.0条件下酶解1～2h，得浒苔第四浸提液。

步骤5：将上述完成分步酶解后得到的产物加热至90～100℃，对残留酶进行灭活，充分搅拌浸泡，处理20～50min，得浒苔第五浸提液。

步骤6：将浒苔第五浸提液在10000rpm离心10～15min，上清液过滤后真空浓缩；向浓缩物中加入乙醇，离心沉淀，沉淀物真空干燥，得到浒苔多糖。

本发明的有益效果：

本发明采用分步酶解法提取浒苔多糖，在多糖浸提过程中分步加入果胶酶、纤维素酶和木瓜蛋白酶，使其分别在各自酶活力最高的操作环境下处理浒苔浸提液。果胶酶、纤维素酶可水解果胶质和纤维素，有效的溶解细胞壁，使多糖更容易从细胞内释放出来；木瓜蛋白酶不仅能破坏游离的蛋白质，而且能使多糖结合的蛋白质降解，从而使得多糖更充分溶入水中，因此多糖的提取效率和纯度大大提高，并且保留了较高的生物活性。

利用本发明的提取方法所得成品色泽灰白，多糖得率15.92±1.46％，多糖含量为68.35±4.46％。方法稳定、可靠。体外抗氧化实验证实，所制备的浒苔多糖对超氧阴离子自由基的清除能力为73.1％～83.7％，清除能力和V_C相当，且具有剂量效应，说明其具备较强的体外抗氧化活性。

本发明的整个工艺过程中无污染物排放，适合于大规模生产，有益于浒苔资源的开发利用。

具体实施方式

实施例1

步骤1：将浒苔清洗干净，60℃烘干后粉碎、过40目筛。称取1kg浒苔粉末，加入20L蒸馏水，充分搅拌，浸泡15h。得浒苔第一浸提液。

步骤2：向所述浒苔第一浸提液加入柠檬酸调节pH值为4.0，将温度加热至45℃，加入15g果胶酶，充分搅拌，酶解1h，得浒苔第二浸提液。

步骤3：向所述浒苔第二浸提液加入0.1M氢氧化钠调节pH值为5.0，将温度加热至55℃，加入10g纤维素酶，充分搅拌，酶解2h，得浒苔第三浸提液。