[发明专利]一种幽门螺杆菌分型检测的试剂盒无效

专利信息
申请号: 201210486563.7 申请日: 2012-11-26
公开(公告)号: CN102967705A 公开(公告)日: 2013-03-13
发明(设计)人: 马伟民;张永顶;马新民 申请(专利权)人: 深圳市伯劳特生物制品有限公司
主分类号: G01N33/569 分类号: G01N33/569;G01N33/544
代理公司: 深圳市深佳知识产权代理事务所(普通合伙) 44285 代理人: 唐华明
地址: 518054 广东省深圳市南山*** 国省代码: 广东;44
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摘要:
搜索关键词: 一种 幽门 螺杆 菌分型 检测 试剂盒
【说明书】:

技术领域

发明属于生物技术领域,具体的说是涉及一种幽门螺杆菌分型检测的试剂盒。

背景技术

幽门螺杆菌(Helicobacter Pylori),简称HP,1983年由澳大利亚学者Barry Marshall和Robin Warren首次从胃粘膜组织分离得到。经过各国学者多年的研究证实,Hp在慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌等消化道疾病致病中起重要作用。HP的发现是胃肠病学史上一个革命性进展,2005年Robin Warren和Barry Marshall因此获得诺贝尔医学奖。

HP与胃十二指肠疾病的关系,一直是各国学者研究的主要课题。大量的流行病学调查证实,自然人群中HP感染率相当高,HP在全球人群的感染率超过50%,而且随着年龄的增加有递增趋势,而且感染情况与致病性因地域不同有很大差异,不同国家和地区分离的HP菌株基因结构呈现人群或地区性差异,因此HP致病差异性已引起人们重视。较多的研究表明HP的致病性主要与菌型差异、感染的年龄及机体的反应性、地域性、饮食习惯等有关。

目前临床上按照是否表达致病因子细胞毒素蛋白(CagA)和空泡毒素蛋白(VacA)将HP分为两型:I型为产细胞毒素的HP,CagA和VacA均表达或有任一表达,其致病力强,易引起胃部疾病;II型为不产细胞毒素的HP,CagA和VacA均不表达,其毒性较弱,感染后一般无明显临床症状。所以临床上不能仅限于检出HP,进一步HP分型检测对临床消化道疾病的诊断和治疗具有重要的参考价值。

根据国际最新的Maastricht-III共识意见和我国幽门螺杆菌诊治共识意见(2007),检测Hp感染的方法有侵入性和非侵入性两类。侵入性方法依赖胃镜活检,包括快速尿素酶试验(RUT)、胃黏膜直接涂片染色镜检、胃黏膜组织切片染色镜检(如WS银染、改良Giemsa染色、甲苯胺蓝染色、免疫组化染色)、细菌培养、基因检测方法、免疫快速尿素酶试验(IRUT)。而非侵入性检测方法不依赖内镜检查,包括13C或14C-尿素呼气试验(UBT)、粪便Hp抗原(HpSA)检测(依检测抗体可分为单抗和多抗两类)、血清和分泌物(唾液、尿液等)抗体检测、基因芯片和蛋白芯片检测等。由于侵入性方法采样需借助胃镜检查,许多患者不愿接受,因而受限制,难以作为大样本进行流行病学调查。而非侵入性方法,患者依从性较好,因而有其实际意义。然而以上的检测方法仅限于检出是否有HP感染,均不能对HP分型。

发明内容

有鉴于此,本发明的目的在于针对现有技术中检测HP仅能检出是否有HP感染而不能对HP分型进行分型的缺陷,提供一种幽门螺杆菌分型检测的试剂盒。

为实现本发明的目的,本发明采用如下技术方案:

一种幽门螺杆菌分型检测的试剂盒,包括转印有经电泳分离的幽门螺杆菌全菌体蛋白的印迹膜。

患者感染幽门螺杆菌后血清中会产生相应抗体,而且由于所感染的幽门螺杆菌类型不同,因此所产生的抗体类型也不同。本发明采用免疫印迹法,将待检样品与本发明所述转印有经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的幽门螺杆菌全菌体蛋白的印迹膜反应,待检样品中的抗体就会与印迹膜中蛋白抗原结合,然后经过酶联免疫反应出现显色区带,据此判断出待检样品中所含HP抗体类型,进而对患者所感染的HP进行分型。

其中,本发明所述印迹膜的制备方法为取HP全菌体蛋白用样品缓冲液稀释,利用SDS-聚丙稀酰胺凝胶梯度不连续电泳将各种蛋白组分按分子量大小分开,然后利用湿转法将HP全菌体蛋白由凝胶层中转移到硝酸纤维素膜上即得。

作为优选,本发明所述试剂盒还括酶标记抗体和酶底物。

在本发明中,所述酶标记抗体为酶标记的抗人IgG抗体。

作为优选,所述酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶。

作为优选,本发明所述试剂盒还包括洗涤液、阳性对照、阴性对照、标准带中的一种或几种。

在本发明中,所述洗涤液为磷酸盐缓冲液。

在本发明中,所述阳性对照为HP细胞毒素蛋白抗体、HP空泡毒素蛋白抗体和尿素酶抗体的混合溶液。

在本发明中,所述阴性对照为正常人HP抗体阴性血清。

在本发明中,所述标准带为标示HP细胞毒、HP空泡毒和尿素酶蛋白距起始线的相对位置的条带。

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