[发明专利]一种增强嫁接植物病毒抗性的方法

权利要求书

1.一种制备转基因番茄砧木的方法，包括如下步骤：

（1）番茄播种，番茄的种子播种前经无菌水浸润5~8小时后于培养箱中催芽；

（2）切子叶预培养，在真叶未出现前，子叶刚冒出种皮且未完全展开时，将子叶两端切除1-2mm，再从中间横切一刀，每个子叶切成两块，进行预培养；

（3）将根癌农杆菌侵染预培养过的叶盘外植体，进行共培养；其中根癌农杆菌含有对卡那霉素抗性基因标记的载体；

（4）将根癌农杆菌侵染后的子叶转入培养基C中，叶背朝上光照培养，待愈伤上芽点出现，将带芽点外植体转入C1培养10~14d，分化出芽；其中，培养基C中：pH 6.0，Medium 

Base +2mg/L反式玉米素核苷+ 200mg/L特美汀 +100mg/L卡那霉素；培养基C1中：pH 6.0，Medium Base +1 mg/L反式玉米素核苷 +80 mg/L卡那霉素 +200 mg/L特美汀；

（5）促分化培养，待再生芽长出后切去白化外植体部分将抗性芽转入培养基C3中：pH 6.0，Medium Base +0.5 mg/L反式玉米素核苷 +1.5 mg/L 3-吲哚乙酸+80 mg/L卡那霉素+ 200 mg/L特美汀；

（6）生根培养，待抗性芽茎部长至1cm后，剔除愈伤组织，切下置入培养基D中生根培养15~30d，培养基D为：pH 6.0，Medium Base +2mg/L吲哚丁酸+ 200mg/L特美汀；

（7）田间培养：移栽至大田。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，种子用无菌水浸润后于30℃培养箱催芽，待种子露白，点播于1/2MS培养基中，然后转入26~28℃光照培养箱培养；步骤（2）中，预培养为弱光预培养。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）中，共培养的温度为26℃，且为暗培养。