[发明专利]一种从莲蓬中提取多酚氧化酶的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然食品和药物提取技术领域，特别涉及一种多酚氧化酶的提取方法。

背景技术

多酚氧化酶（polyphenoloxidase, PPO）是一种广泛分布于真菌、植物、昆虫以及哺乳动物的金属蛋白酶。多酚氧化酶可分为三大类：单酚单氧化酶（酪氨酸酶tyrosinase）、双酚氧化酶（儿茶酚氧化酶catechol oxidse）和漆酶（laccase）。在这三大类多酚氧化酶中，儿茶酚酶主要分布在植物中，微生物中的多酚氧化酶主要包括漆酶和酪氨酸酶。在食品加工和果蔬生产中，多酚氧化酶是植物体氧化褐变的主要原因之一，对食品的变质有很大的损害作用。然而，从植物生理学角度考虑，多酚氧化酶在植物自防御系统里发挥重要作用，是其防御虫害、菌害的关键因素。多酚氧化酶是酚类代谢系统的关键性酶，能催化酚类转化成醌类，醌类与木质素构成保护性屏蔽而使细胞免受病菌的侵害，另外也可以通过形成醌类物质直接发挥抗病作用。目前，多酚氧化酶在黄瓜对黑星病的抗性，苹果对轮纹病的抗性，香蕉对束顶病的抗性，柠檬对流胶病的抗性，甘薯对蔓割病的抗性，水稻对白叶枯病的抗性的研究中取得了较大的进展。这方面的发展无疑促进了多酚氧化酶取代部分农药的发展，对环境保护和资源利用具有深远意义。另外，在茶叶的加工过程中，多酚氧化酶发挥的作用尤为突出，除了少量的绿茶、黄茶以外，大部分的茶叶发酵加工都是基于多酚氧化酶的催化氧化作用。研究发现利用外源的多酚氧化酶对发酵过程中的茶叶进行处理，可以改善茶叶的风味和口感，明显提高成茶的TF含量，减少TB含量。除此之外，多酚氧化酶在含酚废水的处理、环境中酚类毒物的降解、饮料加工、食用和药用菌生产、饲料工业及医药卫生等各个领域有着广泛应用。而利用微生物发酵合成酪氨酸酶也已成为研制治疗白瘫风、帕金森病和老年痴呆症等疾患药物的努力方向。随着科学技术的进步，多酚氧化酶的应用技术会越来越广泛，这就对多酚氧化酶的提取纯化技术提出了要求。

莲（Nelumbo nucifera, Gaertn.），是多年生草本植物，分布于世界各地，尤其以中国、印度和日本的栽种面积最广。我国是莲生产面积最广的国家，栽种区域主要分布于福建、江西、湖北和安徽等省份。莲蓬，是莲子生产过程中产生的副产物，一般被农户或生产商丢弃，造成很大的资源损失和环境污染。莲蓬富含多酚氧化酶，是多酚氧化酶的良好生物来源。莲蓬的蛋白含量比较低，从莲蓬中提取多酚氧化酶，减少了杂蛋白分离的难度。另外，提取过程中主要的干扰成分是一些水溶性的多酚或者生物碱成分，分子量较小，易于分离，这就保证了多酚氧化酶较高的提取率。这些优点是目前一些从果蔬或者发酵产物提取多酚氧化酶无法比拟的。该发明采用的方法提取所得的多酚氧化酶具有非常高的纯度（97%以上），为其在生物医药等领域的利用提供了工业生产的可能。总之，这种多酚氧化酶的提取利用的方法具有较高的社会价值和经济价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种从莲蓬中提取多酚氧化酶的方法。

本发明是通过以下技术方案实现的。

本发明所述的一种从莲蓬中提取多酚氧化酶的方法，按如下步骤。

(1)提取缓冲溶液的制备：在0.1~1.0mol/L pH 5.0~8.0的磷酸盐缓冲液中加入Triton X-100、聚乙二醇和NaCl等破壁剂制得提取缓冲溶液，使该提取缓冲溶液含Triton X-100 0~5 g/100mL、聚乙二醇0~5 g/100mL、NaCl 0.1~2.0 g/100mL，2℃~5℃冷却处理。