[发明专利]用于抗棉铃虫性生物测定的棉叶保鲜方法

说明书

一、技术领域

本发明涉及一种保鲜方法，具体涉及一种在棉花育种领域用于抗棉铃虫性生物测定的棉叶保鲜方法。

二、背景技术

抗棉铃虫室内生物测定起始于转Bt基因抗虫棉的研发，我国自1992年范云六、郭三堆等对Bt基因进行改造、获得具有自主知识产权的抗虫性极强的Bt基因后，科研工作者将这些Bt基因转入到棉花品种中进行抗虫棉新品种的创立，从而开始了国内抗棉铃虫室内生物测定的研究工作。室内抗棉铃虫生物测定就是将测定材料转入了Bt等抗虫基因的抗虫棉顶端生长倒2～3片真叶饲喂棉铃虫低龄幼虫，观察测定材料的抗虫效果。

棉铃虫幼虫的生物测定是能够直观的反应棉花各器官对于棉铃虫幼虫抗虫性表现的一种方法，其优点在于便于观察、操作简便、成本较低、准确性高。但是在生物测定过程中，需要解决棉花叶片的保鲜问题。

中国棉花研究所马丽华、李春华1998年报道了用于室内抗棉铃虫性生物测定的琼脂培养基叶片保鲜法。虽然该方法能够为棉叶提供充足营养，但是此方法也存在弊端。首先，琼脂培养基表面存在水分，对于进行生物测定的棉铃虫幼虫有影响；其次，培养基对环境条件要求较高，若在不洁净的条件下培养基容易产生霉变，并对棉花叶片造成一定的污染，测试中途需要更换保鲜棉叶和培养基及转接测试幼虫，致使测定工作量加大，并影响试验效果。中国专利ZL200820137401.1说明书公开了一种抗棉铃虫性生物测定棉叶保鲜装置，包括盒体、盒盖，盒体为聚丙烯塑料盒体，盒盖为聚丙烯塑料盒盖，盒体底部填充有一层聚氨酯人造海绵，聚氨酯人造海绵上均匀开有缝口。具体是在长14cm×宽10cm×高6cm规格的聚丙烯盒内填聚氨酯并划3个2cm长等距离刀口，注入20mL纯净水后插入保鲜测试棉叶，在室温26℃和自然光周期条件下，保鲜30d。虽然该方法能达到棉叶保鲜的目的，但需要较大的专用盒体，并且聚氨酯人造海绵切口徒手操作人为性大，一致性差，增加了测定工作量。

因此，为提高棉花抗虫性室内生物测定方法的效率，需要对生测过程中的棉叶保鲜技术进行不断改良和保鲜新方法开发。以开发出满足测定需要、工序简单、操作方便、一致性高、通用性强、成本经济的棉叶保鲜方法。

三、发明内容

本发明目的是提供一种用于棉花品种抗虫性室内生物测定的棉叶保鲜方法。本方法包括棉叶摘取与处理、放入培养皿、接虫、培养皿整理、皿内培养等步骤，其具体步骤及技术要点为：

a.将新鲜的棉叶摘下，留取叶柄1-1.5cm；

b.将脱脂棉用营养液湿润后，包裹在棉叶叶柄处，并使棉球不滴水；

c.将脱脂棉包裹好的棉叶正面向上放入培养皿中；

d.将待测的棉铃虫幼虫接入到棉叶上；

e.将PVC保鲜膜裁制成略大于培养皿的大小，将其包裹在培养皿上，使其平展，然后将培养皿盖子盖在已包裹好的培养皿上；

f.用黑布覆在培养皿盖上；

g.在室温下培养，直至生测。

所述的营养液有效成分及浓度分别为：硝酸钾1.8-2.0g/L，硝酸铵1.5-1.8g/L、磷酸二氢钾0.15-0.2g/L、7H₂O硫酸镁0.3-0.4g/L、2H₂O氯化钙0.3-0.5g/L。

本方法所使用的营养液能够代替土壤给植物提供K、N、Mg、P、Ca、S、等离子螯合态营养元素，具有缓释效应和缓冲性能，能有效的提供植物所需养分，使叶柄断裂处的细胞在吸收水分的同时亦吸收营养液的营养元素成分，并且能够通过扩散作用，外界的高浓度营养元素能够进入植物体内，尽量保持叶片的鲜活能力，从而使植物能够更具有更多的能量来保持更好的活性，达到保鲜的效果。

本发明营养液为棉叶提供了足够的水分和低浓度的大量元素，供给棉花叶片在培养期间的生理需要，保鲜效果均在一周以上。又避免了琼脂培养基存在的易于污染的问题，在一周的保鲜期内棉叶不变色、不萎蔫、不变质腐烂，保持新鲜状态。从而在测定期间中途不需要更换棉叶和培养基，也不需要转接棉铃虫幼虫，简化了生测步骤，操作简便，准确性高。同时上述营养液的配方简单，药品均为常见药剂，容易购买；聚苯乙烯培养皿相比玻璃培养皿价格低、不易破碎、易于输送；脱脂棉为医用脱脂棉花，方便易得。从而保证了本方法的方便实用、高效经济。

四、具体实施方式

实施例1。

一种用于抗棉铃虫性生物测定的棉叶保鲜方法，包括棉叶摘取与处理、放入培养皿、接虫、培养皿整理、皿内培养等步骤，具体步骤及技术要点为：