[发明专利]一种石斛多糖含量的测定方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于中药及其提取物的化学分析技术领域，特别涉及一种石斛多糖含量的测定方法及其应用。

背景技术

多糖（polysaccharide）由多个单糖分子缩合、失水而成，是一类分子结构复杂且庞大的糖类物质，其相对分子质量从几万到几千万不等。多糖在自然界分布极广，亦很重要，有的是构成动植物骨架结构的组成成分，如纤维素；有的是作为动植物储藏的养分，如糖原和淀粉；有的具有特殊的生物活性，像人体中的肝素有抗凝血作用，肺炎球菌细胞壁中的多糖有抗原作用。近年来多糖研究越来越深入，逐渐成为生命科学研究的前沿。

多糖的测定方法有很多种，如斐林法、蒽酮-硫酸法、高效液相色谱法、毛细管电泳法、酶法和苯酚-硫酸法等，各测定方法有各自的优点和缺点，如毛细管电泳法和高效液相色谱法精密度较高但需要多糖纯品，对测定样品的要求高，成本较高；蒽酮-硫酸法和苯酚-硫酸法等测定多糖时蛋白的干扰比较明显。由于苯酚-硫酸法操作简便，精确度较好，是目前多糖测定中较常使用的一种方法。

石斛是我国名贵的中药材，最早记载于《神农本草经》，被列为上品，具有滋阴清热、生津益胃、强身等功效。石斛多糖是石斛的主要药效成分之一，有抗肿瘤、降血糖、抗衰老和增强免疫等作用。石斛精多糖的获得是一个非常复杂的过程，需要经过热水浸提、粗多糖提取以及蛋白去除等步骤，其中制备1g精多糖需要耗费500g左右鲜石斛，传统的制备及测定方法具有耗时、耗力和耗材的缺点。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种石斛多糖含量的测定方法。

本发明的另一目的在于提供所述石斛多糖含量的测定方法的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种石斛多糖含量的测定方法，包括以下步骤：

标准曲线的制备：分别吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、2.0ml的0.05mg·mL^-1的葡萄糖标准液，各加蒸馏水补至2.0ml，然后各加6wt%重蒸苯酚1.0ml，摇匀后加入98wt%浓硫酸5.0ml，摇匀，静置5min后置沸水浴中加热20min，冷却至室温，于490nm处测定吸光度；以吸光度为纵坐标、葡萄糖浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程；

换算因子（f）的测定：取50μg·ml^-1石斛精多糖溶液0.05～1ml，加蒸馏水补足至2.0ml，各加6wt%重蒸苯酚溶液1.0ml，摇匀后加入98wt%浓硫酸5.0ml，摇匀，静置5min后置沸水浴中加热20min，冷却至室温，于490nm处测定吸光度，根据回归方程计算石斛精多糖溶液的浓度；计算换算因子f：f＝Cs/C，其中，Cs为石斛精多糖溶液的实际浓度，C为回归方程计算石斛精多糖溶液的浓度；

石斛样品溶液中石斛多糖含量的测定：吸取石斛样品溶液0.05～1ml，各加蒸馏水补至2.0ml，然后各加6wt%重蒸苯酚1.0ml，摇匀后加入98wt%浓硫酸5.0ml，摇匀，静置5min后置沸水浴中加热20min，冷却至室温，于490nm处测定吸光度，由回归方程计算石斛样品溶液中石斛多糖的浓度，由下述公式计算石斛样品溶液中石斛多糖含量（X）：X=f×C’×D×100%/W；

式中：f-换算因子（即石斛多糖相当于葡萄糖的校正系数），C’--由回归方程得到的石斛样品溶液中的葡萄糖含量，D--样品（石斛干燥粉末）测定中的稀释倍数，W--石斛干燥粉末的质量；

所述的石斛样品溶液优选采用以下方法进行制备：将石斛粉末按质量体积比1g/100～150ml加入80wt%乙醇中（即1g石斛粉末加入100～150ml 80wt%乙醇），80～90℃回流提取2～3次，每次0.5～1h，抽滤后取滤渣；往滤渣中按质量体积比1g/100～150ml加入蒸馏水（即1g滤渣加入100～150ml蒸馏水），80～90℃回流提取2～3次，每次0.5～1h，抽滤后取滤液，合并滤液，用蒸馏水定容至50mL，摇匀，得到石斛样品溶液；

所述的石斛粉末优选为过60目筛的干燥石斛粉末；

所述的石斛精多糖溶液优选采用以下方法进行制备：取石斛精多糖，加蒸馏水配制成50μg·ml^-1的石斛精多糖溶液；

所述的石斛精多糖优选采用以下方法进行制备：