[发明专利]检测尿液中病毒特异性核酸的组合物和方法

说明书

本申请是申请日为2006年2月16日的中国专利申请200680012790.9“检测尿液中病毒特异性核酸的组合物和方法”的分案申请。

技术领域

本发明涉及跨肾病毒核酸在制备用于诊断病毒感染的药物中的用途。还涉及检测跨肾病毒存在的试剂盒。

背景技术

目前存在三种类型的体外诊断系统，广泛用于检测病原体。这些是生物样品的病原体的直接培养；基于传染剂产物或抗原检测的免疫测定；和可以检测传染过程中对抗传染剂产生的抗体的间接免疫测定。

在第一个系统中，主要缺陷是认为生物样品存在传播病原体的危险。在第二个和第三个系统中，缺陷包括样品提取，这通常是入侵性的并在收集时可能是传染性样品。在第三个系统中，一个主要的缺陷是在过去和现在传染之间通常存在很小的区分可能性。

最近，基于取自个体的血液或血浆样品，或细胞培养物中的病原体核酸检测，已经产生了分子诊断方法。这些测定通常比免疫测定灵敏得多。然而，它们需要特定设备和专业人员的存在。此外，生物样品——在血浆、血液或细胞培养物的情况中——难以存储而没有发生变化，除非在受控的温度条件下，并且认为对操作人员是有生物危害性的。

最近，已经描述了基于跨肾(transrenal)DNA(Tr-DNA)的分子诊断方法，用于监控异源移植的进展、诊断胎儿的性别和检测肿瘤标记的存在。(Botezau等，Clinical Chemistry 46(8)：1078-84(2000)；Su等，Ann.NY Acad.Sci.1022：81-89(2004))。例如，U.S.专利No.6,251,638描述了在怀孕妇女尿液中检测男性胎儿DNA的分析方法。U.S.专利No.6,287,820描述了目的在于诊断肿瘤的系统，特别是结肠和胰腺的腺癌。U.S.专利No.6,492,144教导了可以用于监控异源移植进展的Tr-DNA核酸分析方法。Al-Yatama等(2001)中，Prenat Diagn，21：399-402；和Utting，M.等(2002)，Clin Cancer Res，8：35-40。Keiko Koide，等，Prenat Diagn，2005；25：604-607；Mengiun Wang，等，Clinical Chemistry，2004，50：211-213；Y.-H.Su，等，J.Mol.Diagn.，2004，6：101-107中还描述了跨肾DNA以小于1000个碱基对的核酸片段的形式存在于尿液中。

已经将跨肾DNA的存在解释为凋亡现象的结果。在凋亡或程序化细胞死亡的过程中，核DNA分裂成核小体和寡聚物，其随后，作为凋亡过程的一部分，被吞噬并从生物体中排出。(Umansky，S.R.，等(1982)；Biochim.Biophys.Acta，655：9-17)。尽管该降解DNA的一部分避开了吞噬作用，但出现于血流中(Lichtenstein，A.V.等(2001)，Ann NY Acad Sci，945：239-249)，并且，如上述提及的专利中所证实的，也存在于尿液中。

在本申请之前，还没有描述尿液中存在来源于尿道外来源的病毒DNA。已经表明了从血浆中转染细胞基因组释放的病毒DNA的循环。例如，在鼻咽癌个体的血浆中检测到EB病毒DNA的片段(Chan，K.C.，等(2002)，Cancer Res 63：2028-2032)。此外，在宫颈癌个体的血浆中已经检测到人乳头状瘤病毒(HPV)的病毒DNA(Pornthanakasem，W.，等(2001)；BMC Cancer 1∶2)。然而，在个体尿液中没有检测到这些病毒DNA。

本发明描述了通过检测个体尿液中那些病原体的DNA序列来检测个体中病毒病原体存在的方法。

发明内容