[发明专利]miR-296-3p在制备前列腺癌发生或转移诊断试剂盒中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学材料技术领域，本发明公开了一种小分子非编码RNA的用途，尤其涉及一种小分子非编码RNA即miR-296-3p在制备肿瘤发生或转移诊断试剂盒中的应用。

背景技术

前列腺癌（prostate cancer,Pca）是发生于男性前列腺组织中的恶性肿瘤，发病随年龄而增长，其发病隐匿，生长缓慢，病因复杂，给临床的早期诊断带来很大的障碍。前列腺癌容易发生淋巴结转移和骨转移，是引起前列腺癌患者死亡的主要原因，也一直是基础和临床研究的热点。前列腺癌的常用治疗手段主要有内分泌治疗、手术治疗，化疗和放疗。比较新的免疫治疗和基因治疗也有巨大应用潜力。近年来不断有文献报道microRNA在肿瘤诊断和治疗中的重要作用，前列腺癌特异性miRNA的发现为其诊断和治疗打开了一个全新的局面。microRNA是一类内源性小分子非编码RNAs，结构高度保守，具有表达时序性和组织特异性，通过与靶基因3’非编码区(3’UTR)互补序列特异性结合，导致翻译抑制或者mRNA降解，从而调节基因表达[1]。microRNA在恶性肿瘤中表达谱各异并发挥着重要的调控作用，随着大规模、高通量miRNA检测技术的推广应用，发现新的miRNA不仅为肿瘤的诊断和预后提供了颇具价值的标准，同时也为寻找新的肿瘤生物治疗靶标奠定基础[2]。

研究发现前列腺癌组织中存在miRNA表达谱差异，它们的表达水平和肿瘤细胞的分化程度密切相关，而常规的mRNA标志物不具备此特点。Kati PP，Minja JP等[3]检测了前列腺组织和细胞中319种miRNA的表达谱，发现位于染色体缺失区域的miRNA低表达，而位于扩增区的miRNA高表达，它们通过靶向一些肿瘤相关基因如RAS、BCL2等最终影响前列腺肿瘤细胞或正常细胞的生长分化。Annika Schaefer，Monika Jung等[4]采用微阵列技术和实时荧光定量PCR分析了155例前列腺癌病人组织中miRNA的表达谱，结合临床病例数据，通过ROC分析发现了可以作为诊断标志物的miR-205；而在Kaplan-Meier分析和Cox比例风险回归分析之后，发现了可以作为预后诊断标志物的miR-96。首次报道与临床前列腺癌疗效和转移相关的单个miRNA是miR-221[5]。Martin Spahn，Susanne Kneitz等在分析了不同类型的临床标本之后发现：98%的前列腺癌组织中都伴随有miR-221的特征性表达下调。根据Gleason评分或肿瘤分期和复发率，miR-221表达的进行性降低和高危肿瘤以及不良预后密切相关。而且miR-221的表达下调是前列腺癌特异性的，属于转移过程中的频发事件。进一步的研究表明其可能的作用机制与c-kit致癌基因有关。基于前列腺癌中miR表达谱差异的一系列研究为后续的功能分析提供了丰富的证据，也为临床诊断和预后评价以及寻找新的高危前列腺癌治疗靶标开辟思路。

P69和M12属于前列腺癌同源细胞系，P69来源于SV40T永生化的人非致瘤性前列腺上皮细胞[6]。随后通过裸鼠皮下成瘤实验和在体筛选，得到了具有局部侵袭和远端转移能力的M12细胞。二者的遗传背景一致，但是致瘤能力和转移潜能差异很大，是研究前列腺癌转移机制的理想模型。

有关miR-296的研究报道还比较少，Thomas等报道miR-296能够直接调控HGS mRNA有效促进肿瘤血管发生[7]；miR-296能够下调p21^WAF1表达，改变p53-p21^WAF1通路从而促进肿瘤发生[8]。现有的文献所报道的miR-296多为miR-296-5p，对miR-296-3p的研究目前仅有6篇报道[9-14]，其中一篇主要针对胶质细胞瘤的药物抵抗性[9]，其他研究主要集中在miR-296-3p与其它miRNA共同调节某个或某些基因的表达[10]，鲜有miR-296-3p对于肿瘤生长转移相关功能的研究。我们的研究聚焦在miR-296-3p对于前列腺癌发生与转移，对于肿瘤发生和转移的治疗具有重大意义。

我们以非转移性前列腺癌细胞系P69和高转移性前列腺癌细胞系M12两个细胞系为主要研究模型进行研究。

参考文献

1.Esquela-Kerscher A,Slack FJ.Oncomirs-microRNAs with a role in cancer[J].Nat Rev Cancer,2006,6(4):259-269。