[发明专利]生物样品中待检物的夹心免疫PCR检测方法和试剂盒

权利要求书

1.一种生物样品中待检物的夹心免疫PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）第一抗体或受体的固定：在支持物上连接生物样品中待检物的第一抗体或受体；

2）特异性捕捉生物样品：使生物样品中的待检物通过一个连接位点与所述第一抗体或受体结合；

3）连接第二抗体或受体：将待检物的第二抗体或受体连接到所述待检物的另一个连接位点上，其中，所述第二抗体或受体标记有第一核苷酸序列；

4）杂交：将与所述第一核苷酸序列具有互补的第二核苷酸序列与所述第一核苷酸序列杂交；

5）转移：采用置换或酶切核酸的方法从所述支持物上洗脱所述第二核苷酸序列并转移到PCR管中；

6）检测：定量PCR检测所述PCR管中第二核苷酸序列的含量，该含量反应了所述生物样品中待检物的含量。

2.根据权利要求1所述的生物样品中待检物的夹心免疫PCR检测方法，其特征在于，

所述第一核苷酸序列具有序列表SEQ ID NO.1所示的序列；

所述第二核苷酸序列具有序列表SEQ ID NO.2所示的序列。

3.根据权利要求1或2所述的生物样品中待检物的夹心免疫PCR检测方法，其特征在于，所述步骤5）中采用置换核酸方法从所述支持物上洗脱所述第二核苷酸序列包括：采用与所述第一核苷酸序列互补的置换核酸分子与所述第二核苷酸序列进行置换，所述置换核酸分子为具有序列表SEQ ID NO.5所示序列的DNA序列或所述置换核酸分子为具有序列表SEQ ID NO.6所示序列的肽核酸。

4.根据权利要求1所述的生物样品中待检物的夹心免疫PCR检测方法，其特征在于，所述第一核苷酸序列和所述第二核苷酸序列中均包含酶切位点，所述步骤5）中采用酶切核酸方法从所述支持物上洗脱所述第二核苷酸序列采用限制性内切酶进行洗脱。

5.根据权利要求1所述的生物样品中待检物的夹心免疫PCR检测方法，其特征在于：所述待检物为人γ干扰素。

6.一种生物样品中待检物的夹心免疫PCR检测试剂盒，其特征在于包括：

支持物；

待检物的第一抗体或受体； 

待检物的第二抗体或受体，该第二抗体或受体标记有第一核苷酸序列；

单链DNA片段，该单链DNA片段具有与所述第一核苷酸具有互补的第二核苷酸序列；

以及酶切试剂或与所述第一核苷酸序列互补的置换核酸分子；

所述酶切试剂包括酶解反应液和酶解反应终止液。

7.根据权利要求6所述的生物样品中待检物的夹心免疫PCR检测试剂盒，其特征在于：

所述第一核苷酸序列具有序列表SEQ ID NO.1所示的序列；

所述第二核苷酸序列具有序列表SEQ ID NO.2所示的序列。

8.根据权利要求6所述的生物样品中待检物的夹心免疫PCR检测试剂盒，其特征在于：所述置换核酸分子为具有序列表SEQ ID NO.5所示序列的DNA序列或所述置换核酸分子为具有序列表SEQ ID NO.6所示序列的肽核酸。