[发明专利]降钙素原检测试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及降钙素原检测试纸条及其制备方法。

背景技术

降钙素原(Procalcitonin，PCT)是降钙素的前体，主要在甲状腺滤泡旁细胞内合成，是由116个氨基酸组成的糖蛋白，分子量大约13KD。它可以在酶的作用下逐步裂解成57个氨基酸的氨基PCT，32个氨基酸的CT和21个氨基酸的降钙蛋白。降钙素原是11号染色体上降钙素I基因(CAI C-I)的表达产物，在不存在感染的情况下，甲状腺外CALC-I表达被抑制，而主要局限于甲状腺和肺的神经内分泌细胞有一定程度的表达，在细菌感染时可诱导全身各种组织多种类型细胞CALC-I表达和PCT连续性释放。降钙素原的生成非常快，内毒素刺激反应2h~6h之内即升高(正常人血浆中的PCT浓度<0.15μg/L)，PCT值的下降取决于其在血浆中的衰减和新生成的PCT间的平衡，PCT的半衰期大约为20h~24h，在败血症休克患者中，血浆PCT不断产生，并保持高值，已经报告在败血症休克恢复的患者中，PCT血浆浓度平均2.4天降到初始浓度的50%，而在最终死亡的患者中PCT升高的水平持续达27天。

近年大量研究结果显示，PCT这个指标能够诊断性地区分细菌感染与病毒感染。这为微生物检测的选择提供了依据，在降低资源浪费的同时可快速明确病原学诊断，为抢救病人提供了宝贵的时间，提高了治疗效果。

目前检测PCT的方法有很多种，除过去使用费时不易自动化的凝胶层分析法和高效液相色谱分析法外，现今检测PCT较特异、敏感的方法有：酶联免疫吸附法，放射免疫法、免疫荧光法和胶体金免疫层析法。

酶联免疫吸附法是利用两种鼠单克隆抗体双抗体夹心法原理检测血清中PCT，方法较特异，无交叉反应。但是酶联免疫吸附法检测敏感性低，最低限为仅10μg／L，正常人血清中PCT浓度不能检出。

放射免疫法使用由人体合成的57个氨基酸部分制成R2B7特异多克隆抗体，R2B7直接作用PCT的57个氨基酸部分，既能检测游离型PCT，又能检测结合型PCT，检测灵敏度高，最低限为4pg／L。但放射免疫法检测所需时间较长，通常需要数小时，且放射性元素的污染限制了此方法的应用。

免疫荧光法是一种定量的免疫荧光检测方法，两种鼠单克隆抗体与PCT抗原的两个不同的结合位点结合，一种抗体经荧光标记(示踪剂)，另一种固定在试管壁，抗体与血清中的PCT分子反应形成“夹心复合物”，荧光标记抗体被缚在试管壁上，通过发光试剂记数荧光标志物的含量，荧光信号的强度与标本PCT浓度成正比，同时测定标准品，根据已知抗原浓度的PCT制成标准曲线后，以定量得到标本的PCT浓度，此方法敏感性与放射免疫法相似。但是免疫荧光法需要配备昂贵的免疫荧光检测仪。

胶体金免疫层析法主要是应用一个单克隆鼠抗降钙素原抗体结合在胶体金上(示踪物)和一个多克隆羊抗-降钙素原抗体(固相)，病人标本加到反应孔后，示踪物结合样品中的PCT并形成明显的抗原抗体复合物，该复合物经虹吸作用通过观察区，在这里标记的抗原抗体复合物结合到同定的抗降钙素原抗体上形成夹心复合物。当PCT浓度≥0.5μg/L时，夹心复合物呈红色带，颜色深浅与样品中的PCT浓度成正比例，未结合的示踪物扩散到对照区，结合并产生了红色的对照带。胶体金免疫层析法快速简单，但是仅能半定量检测。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种快速、准确、可定量的检测人血清中的降钙素原的原检测试纸条及其制备方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

一种降钙素原检测试纸条，包括依次设置的加样区、结合物释放区、反应区和吸水区；所述结合物释放区为包被量子点标记的降钙素原单克隆抗体的结合物释放垫；所述反应区为分为测试区（T区）和控制区（C区），所述反应区为测试区包被降钙素原，控制区包被抗鼠IgG抗体的固体支持物。

本发明所述降钙素原检测试纸条将包被有量子点标记的降钙素原单克隆抗体结合物释放区与包被有降钙素原的测试区（T区）连接在一起，利用量子点免疫层析法竞争性结合单抗原理，即被检者血清的降钙素原与包被在支持物上的降钙素原竞争性结合降钙素原单克隆抗体的原理，通过检测被激发的量子点的荧光强度，定量检测人血清中的降钙素原。