[发明专利]油藏中芽孢杆菌（Bacillus）的快速检测方法

权利要求书

1. 一种油藏中芽孢杆菌（Bacillus）的快速检测方法，其特征在于，所述方法包括下列步骤：

（1）油藏样品的采集；

（2）通过高温灭活样品中除能形成芽孢的菌以外的其它微生物；

（3）收集灭活后样品中的芽孢；

（4）将收集的芽孢接种于培养基、在油藏原位温度条件下对芽孢菌进行复活培养；

（5）通过分子生物学方法检测复活的芽孢菌菌群。

2.如权利要求1所述的油藏中芽孢杆菌（Bacillus）的快速检测方法，其特征在于，所述油藏为不同地质条件、不同开采方法的各类油藏。

3.如权利要求2所述的油藏中芽孢杆菌（Bacillus）的快速检测方法，其特征在于，油藏样品包括：注水井井口样品，油井井口样品，地层水样品，油井返排样品以及岩芯样品。

4.如权利要求3所述的油藏中芽孢杆菌（Bacillus）的快速检测方法，其特征在于，油藏样品的采集步骤为将采集的油藏样品装入已灭菌的样品瓶中，装满样品瓶，密封，记录样品采集的油藏原位温度。

5.如权利要求4所述的油藏中芽孢杆菌（Bacillus）的快速检测方法，其特征在于，通过高温灭活样品中除能形成芽孢的菌以外的其它微生物步骤为，在无菌条件下取500ml 的油藏样品到无菌烧瓶中，烧瓶口覆盖上有透气孔的无菌微生物培养膜；将烧瓶加热，保持沸腾10分钟，室温冷却。

6.如权利要求5所述的油藏中芽孢杆菌（Bacillus）的快速检测方法，其特征在于，收集灭活后样品中的芽孢步骤具体操作为：待烧瓶中样品冷却后，在无菌条件下将烧瓶中的样品转移到多个50ml的无菌离心管中，10000g离心力离心15分钟，在无菌条件下将上清液转移到一个干净的无菌容器中保存为待用上清液；

然后在每个离心管中加入1ml的无菌水、重悬浮离心管底部收集到的沉淀物，将所有离心管中的重悬浮液收集到一起成为10ml的混合液；混合液中包含有芽孢。

7.如权利要求6所述的油藏中芽孢杆菌（Bacillus）的快速检测方法，其特征在于，将收集的芽孢接种于培养基、在油藏原位温度条件下对芽孢菌进行复活培养步骤具体为：将收集到的10ml的混合液作为种子，在无菌条件下接种到装有30ml培养基的100ml培养瓶中，密封瓶口，在样品采集的油藏原位温度10℃-110℃条件下，摇菌（150rmp）对芽孢菌进行复活培养7-15天，得复活培养液；

所述的培养基是指与微生物原来生长环境相匹配，并能为芽孢复活提供营养物的培养基，培养基成分为：糖蜜2g，（NH4）2HPO4 0.16g，KNO3 0.2g，用待用上清液配制并定容到100ml，加入原油 2g；121℃灭菌20分钟高压蒸汽灭菌，原油来自样品采集油藏。

8.如权利要求7所述的油藏中芽孢杆菌（Bacillus）的快速检测方法，其特征在于，通过分子生物学方法检测复活的芽孢菌菌群步骤具体操作为：在无菌条件下吸取5ml复活培养液于离心管中，10000g离心力离心10分钟，移除上清，在离心管中加入1ml无菌水，重悬浮离心管底沉淀；

通过DNA试剂盒FastDNA Spin Kit for Soil来抽提重悬浮液中的DNA，构建16S rDNA克隆文库，基因测序以及微生物系统发育分析来完成对芽孢杆菌的检测和分析。