[发明专利]手性分离药物制剂中精氨酸的电泳中介微分析测定方法

说明书

本发明公开手性分离药物制剂中精氨酸的电泳中介微分析测定方法。该方法包括如下步骤：（1）将衍生化试剂的溶液进样至毛细管柱中，然后将药物样品溶液进样，再将衍生化试剂的溶液进样，之后将毛细管柱两端插入操作缓冲液中于电压10kV下维持3s～10s进行衍生化反应；（2）在线进行非手性毛细管胶束电动色谱分离测定；（3）将得到药物样品测定的电泳图，对照对照品D,L‑精氨酸电泳图，确定药物样品是否含有D‑精氨酸和/或L‑精氨酸。该方法简便、快速、准确且更经济，具有样品和衍生化试剂的用量极少，易于控制和自动化，专属性强等特点。

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种手性分离药物制剂中精氨酸的电泳中介微分析测定方法。

背景技术

药物制剂中的氨基酸常用于药物的助溶、调节制剂的pH值、增加制剂的稳定性或减轻给药时的疼痛感。已知氨基酸在生命活动中扮演着重要的角色，但某些氨基酸的D-构型具有与其L-构型不同的生理活性，因此，对手性氨基酸的分离分析历来是生命科学、食品科学、环境科学等及相关领域的重要研究内容。

大多数氨基酸无光吸收特征，一般需采用质谱等特殊的检测器或进行衍生化反应后才能被检测。邻苯二甲醛是目前氨基酸分析中使用最广泛的衍生化试剂。在碱性条件下，邻苯二甲醛、巯基试剂与含伯胺基团的化合物迅速反应，生成可进行紫外或荧光检测的异吲哚衍生物。但该衍生物不稳定，易受反应时间、温度以及光线等的影响，须严格控制反应条件，故此法多用于全自动的在线分离分析。邻苯二甲醛衍生物可在330～350nm处进行紫外检测，而过量的衍生化试剂、抗生素及其杂质一般在此波长范围内无吸收，故不干扰对邻苯二甲醛衍生物的检测。

电泳中介微分析是两种或两种以上的物质在毛细管内进行反应，然后在电场作用下分离产物、副产物及未完全反应物等的过程。现有技术中，应用电泳中介微分析技术手性分离氨基酸的文献较少，仅有的研究氨基酸手性分离的方法均存在若干缺陷。如Tivesten等人采用邻苯二甲醛和手性巯基试剂1-硫代-β-D-葡萄糖四乙酸酯进行手性分离，但该方法存在区带展宽效应的缺陷（Journal of High Resolution Choromatography，1996，19：229-233），且在该分离系统中L-精氨酸衍生物与在其之前迁移的一衍生化副产物分离较差（Journal of Choromatography A，1995，708：323-337）；Han等和Fradi等人均选用氯甲酸-9-芴基甲酯（9-fluoroenylmethyl chloroformate）为衍生化试剂以及手性拆分剂，但仅能部分分离精氨酸，且检测波长分别为214nm和210nm，抗生素及其杂质干扰检测（Electrophoresis，2007，28：2765-2770；Journal ofChoromatographyA，2012，1267：121-126）；Martinez-Giron等人采用6-氨基喹啉-N-(羟基琥珀酰亚胺基)氨基甲酸酯（6-aminoquinolyl-N-hydroxysuccinimidyl carbamate）为衍生化试剂以及价格昂贵的手性拆分剂，但检测波长为260nm，抗生素及其杂质干扰检测（Electrophoresis，2009，30：696-704）。目前尚未见文献报道，采用电泳中介微分析技术手性分离药物制剂中氨基酸且能克服上述缺陷的方法，该现状亟待解决。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服了现有技术的电泳中介微分析技术手性分离氨基酸方法存在区带展宽效应、与其他衍生化副产物分离较差，或者仅能部分分离精氨酸、抗生素及其杂质干扰检测、或者价格昂贵等缺陷，提供了一种简便、快速、准确且更经济，具有样品和衍生化试剂的用量极少，易于控制和自动化，专属性强的手性分离药物制剂中精氨酸的电泳中介微分析方法。

本发明的手性分离药物制剂中精氨酸的电泳中介微分析测定方法包括如下步骤：

（1）将衍生化试剂的溶液进样至毛细管柱中，然后将药物样品溶液进样，再将衍生化试剂的溶液进样，之后将毛细管柱两端插入操作缓冲液中于电压10kV下维持3s～10s进行衍生化反应；