[发明专利]一种螺旋藻藻蓝蛋白及其提取方法

权利要求书

1.一种螺旋藻藻蓝蛋白的提取方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

（1）制备螺旋藻粉悬浊液：取螺旋藻粉溶解于磷酸盐缓冲液中，制得螺旋藻粉悬浊液；

（2）制备螺旋藻细胞破碎液：将螺旋藻粉悬浊液采用反复冻融法结合机械破碎法处理，离心取上清，得到螺旋藻细胞破碎液；

（3）制备藻蓝蛋白粗提液1：采用30%和50%硫酸铵溶液分级盐析沉淀螺旋藻细胞破碎液，透析除盐，得到藻蓝蛋白粗提液1；

（4）制备藻蓝蛋白粗提物：将PEG20000和NaCl溶解至藻蓝蛋白粗提液1，配制成PEG20000-NaCl沉淀体系，静置、离心取沉淀，得到藻蓝蛋白粗提物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该方法还包括以下步骤：

（5）制备藻蓝蛋白粗提液2：用磷酸盐缓冲液溶解藻蓝蛋白粗提物，制得藻蓝蛋白粗提液2；

（6）制备藻蓝蛋白精提液：采用PEG20000/Na₂SO₄双水相体系双水相萃取藻蓝蛋白粗提液2，分配平衡、离心分相，取下相，透析除盐，制得藻蓝蛋白精提液；

（7）冷冻干燥制备藻蓝蛋白成品。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤（1）中螺旋藻粉与磷酸盐缓冲液的比例为1mL磷酸盐缓冲液对应0.04-0.05g螺旋藻粉。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤（2）为将螺旋藻粉悬浊液采用反复冻融法结合机械破碎法反复操作三次，反复冻融法结合机械破碎法反复操作三次的步骤为将螺旋藻粉悬浊液置于4-10℃下静置4-8h后至-15--25℃冰冻，将冰块绞碎，再次4-10℃至-15--25℃反复冻融与机械破碎直至反复操作三次；离心的转速为6000-9000rpm，时间为20-30min。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤（3）中硫酸铵溶液分级盐析沉淀的方法为先将硫酸铵溶解至螺旋藻细胞破碎液至30%饱和度，4-10℃静置12-15h，9000-12000rpm下离心20-30min取上清，再向上清中溶解硫酸铵至50%饱和度，4-10℃静置12-15h，9000-12000rpm下离心20-30min取沉淀；

透析除盐的步骤为将沉淀溶解于磷酸盐缓冲液中进行透析30-40h，换5-7次透析液。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤（4）中所述PEG20000-NaCl沉淀体系的组分为20%(w/v)PEG20000和0.8mol/LNaCl；静置为4-10℃静置12-15h，离心为9000-12000rpm下离心20-30min。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（6）中所述PEG20000/Na₂SO₄双水相体系的组分包含10.5%(w/w)PEG20000，5.9%(w/w)Na₂SO₄和0.2mol/LNaCl；分配平衡1-2h后5000-7000rpm下离心20-30min分相；透析除盐的步骤为：将下相溶液置于透析袋中进行透析30-40h，换5-7次透析液。

8.由权利要求1-7任一项所述方法制备的藻蓝蛋白粗提物。

9.由权利要求2-7任一项所述方法制备的藻蓝蛋白成品。

10.根据权利要求9所述的藻蓝蛋白成品，其特征在于，所述藻蓝蛋白成品的羟自由基半清除率IC₅₀=0.191mg/mL；DPPH半清除率IC₅₀=0.296mg/mL；荧光显微镜下其荧光强度与计量成比例关系，荧光分光光度计检测650nm有最大荧光发射峰。