[发明专利]一种检测黄曲霉毒素B1含量的非标记免疫分析方法

说明书

技术领域

本发明属生物检测领域，具体涉及一种检测黄曲霉毒素B1含量的非标记免疫分析方法。 

背景技术

黄曲霉毒素是一类结构类似的化合物，自然界中的黄曲霉毒素主要是由黄曲霉菌和寄生曲霉产生的次级代谢产物。目前发现的黄曲霉毒素有二十余种，其中以黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2和M1最为常见。黄曲霉毒素能对人及动物的肝脏组织产生破坏作用，严重时可导致肝癌甚至死亡。黄曲霉毒素被世界卫生组织划定为Ⅰ类致癌物，以黄曲霉毒素B1毒性最强，其毒性是砒霜的68倍。 

黄曲霉毒素可发生在热带或亚热带地区的农产品出产过程中，同时在储藏、运输等环节也可能引入黄曲霉毒素的污染。花生是最易发现有黄曲霉毒素的农产品，其他如玉米、无花果、果仁及谷物都有可能受黄曲霉毒素污染。由于我国小农户分散型的种植模式，农产品从农田到餐桌的各个环节都有可能受到黄曲霉毒素的污染。而黄曲霉毒素毒性大，危害严重，因此，世界各国对农产品中黄曲霉毒素的含量制定了严格的限量标准，成为控制农产品质量安全的关键环节。 

为了更有力地监测黄曲霉毒素含量，近年来分析检测黄曲霉毒素的技术逐渐增多，灵敏度也逐渐提高。主要有仪器分析方法和免疫分析方法。免疫学方法克服了仪器方法费用高、操作条件要求高、对环境污染大等缺点，具有快速、简便、特异性好、对操作人员和环境危害小等优点。基于免疫方法的试纸条层析技术和酶联免疫试剂盒已被广泛的应用于现场的定性和定量检测。试纸条层析技术可在15min内实现检测，但是只能进行定性分析，无法实现定量检测；酶联免疫试剂盒可进行定量检测，但是耗时需几个小时，操作步骤多。因此，研究建立一种简单、快速、灵敏、可定量检测黄曲霉毒素B1的方法对于快速、准确、在线监控农产品中黄曲霉毒素具有重要的意义。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术存在的不足而提供一种检测黄曲霉毒素B1含量的非标记免疫分析方法。该方法可用于农产品中黄曲霉毒素B1检测，与常规荧光和酶标记免疫分析方法相比具有无需标记的特点。 

本发明为解决上述技术问题所采用的技术方案为： 

一种检测黄曲霉毒素B1含量的非标记免疫分析方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）提供待测样品溶液，检测待测样品溶液在365nm激发波长激发下，加入抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体1C11使黄曲霉毒素B1荧光充分淬灭前后的440nm处（荧光发射光谱中荧光强度最大处对应的波长）的荧光强度值，所述抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体1C11由保藏号为CCTCC NO：C201013的杂交瘤细胞株1C11产生；

（2）基于预先获得的荧光被抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体1C11淬灭强度与黄曲霉毒素B1浓度的关系曲线，由该待测样品溶液的荧光被抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体1C11淬灭强度值即加入抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体1C11淬灭前后的440nm处的两个荧光强度的差值，求得待测样品溶液中黄曲霉毒素B1的含量。

该杂交瘤细胞株1C11已于2010年7月13日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏地址是，中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO. C201013。

按上述方案，所述的步骤（1）中黄曲霉毒素B1荧光充分淬灭后的440nm处的荧光强度值是在待测样品溶液中加入适量抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体1C11，使加入抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体1C11后的待测样品体系中抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体1C11的浓度至少达到使体系中黄曲霉毒素B1的荧光充分淬灭的最小浓度，然后混匀，于37±5℃放置至少0.5h，再经365nm激发波长激发测试得到测得的。 

按上述方案，所述的荧光被抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体1C11淬灭强度与黄曲霉毒素B1浓度的关系曲线是采用以下方法得到的： 

①配制得到一系列浓度的黄曲霉毒素B1标准品溶液，在365nm激发波长激发下获得各浓度的黄曲霉毒素B1标准品溶液的荧光发射光谱，记录440nm处的荧光强度值；