[发明专利]清香藤中环烯醚萜类化合物的制备方法及其应用

权利要求书

1.清香藤中环烯醚萜类化合物的制备方法，其特征在于：

方法一：

(1)粉碎干燥的清香藤茎，然后利用闪式提取技术，溶剂提取法或超声提取法，采用20%-95%的乙醇提取，过滤，合并滤液, 减压回收提取液至醇浓度低于5％，得总提取液； 

    (2)总提取液经大孔吸附树脂柱色谱处理，依次用不同比例的水和醇梯度洗脱，各洗脱部位利用薄层色谱和HPLC 技术，筛选富集环烯醚萜类化合物的有效部位，得到10％ -100％醇洗脱下来的流分为环烯醚萜类化合物的有效部位，即得富含环烯醚萜类成分的粗提物； 

    (3)上述粗提物采用正相硅胶柱色谱法分离，以不同比列的氯仿/二氯甲烷-甲醇-水，石油醚-乙酸乙酯/丙酮或氯仿/二氯甲烷-甲醇作为洗脱剂洗脱，或反相柱色谱分离，或快速中低压反相柱色谱分离，以甲醇-水或乙醇-水梯度洗脱，减压回收溶剂，所得流分利用薄层色谱和HPLC技术，筛选富集环烯醚萜类化合物的有效流分； 

(4)上述步骤(3) 中所得有效流分经半制备或制备型HPLC 色谱分离，以甲醇-水，乙腈-水或甲醇-乙腈-水为流动相洗脱，得到环烯醚萜类化合物；

方法二： 

(1) 粉碎干燥的清香藤茎，然后利用闪式提取技术，溶剂提取法或超声提取法，采用20%-95%的乙醇提取，过滤，合并滤液, 减压回收提取液至醇浓度低于5％，得总提取液； 

(2)将上述总提取液分别用乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶剂，收集得到乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物，乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物经大孔吸附树脂柱色谱处理，依次用水和醇梯度洗脱，各洗脱部位利用薄层色谱和HPLC 技术，筛选富集环烯醚萜类化合物的有效部位，得到10％ -100％醇洗脱下来的环烯醚萜类化合物的有效部位，即得富含环烯醚萜类成分的粗提物；

(3)上述粗提物采用正相硅胶柱色谱法分离，以不同比列的氯仿/二氯甲烷-甲醇-水，石油醚-乙酸乙酯/丙酮或氯仿/二氯甲烷-甲醇作为洗脱剂洗脱，或反相柱色谱分离，或快速中低压反相柱色谱分离，以甲醇-水或乙醇-水梯度洗脱，减压回收溶剂，所得流分利用薄层色谱和HPLC技术，筛选富集环烯醚萜类化合物的有效流分； 

(4)上述步骤(3) 中所得有效流分经半制备或制备型HPLC 色谱分离，以甲醇-水，乙腈-水或甲醇-乙腈-水为流动相洗脱，得到环烯醚萜类化合物；

(5)上述步骤(2)中将剩余水层溶液经活性炭色谱柱，先后利用水(100 ml)洗脱，醇(300 ml)洗脱；

将醇洗脱得到的溶液进行浓缩，得到残渣；

残渣经CH₂N₂甲基化后，利用制备薄层色谱法得到环烯醚萜类化合物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)的醇为乙醇，其梯度洗脱浓度为10％ -100％。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）的大孔吸附树脂选自XAD-4，Diaion HP-20，D101、D102、D401，D1、D2、D3、D4，HPD-100，X-5、D-201，HPD-300，AB-8XAD-6、XAD-7、XAD-8、HPD400、HPD600中的一种。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）为粗提物经正相硅胶柱色谱法处理，洗脱溶剂为氯仿或二氯甲烷-甲醇-水、石油醚-乙酸乙酯/丙酮、氯仿/二氯甲烷-甲醇，洗脱比例分别为50:1：0.1-1:5:1、10:1-1:1、20:1-1：1的洗脱部位富集环烯醚萜类化合物的流分。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，方法一中步骤（3）为粗提物经反相柱色谱或快速中低压柱色谱法处理，洗脱溶剂为1:10-10:1的甲醇-水或乙醇-水，混合比例1:9-9:1的流分为环烯醚萜类化合物的流分；方法二中步骤（3）为步骤(2)的正丁醇萃取物经反相柱色谱或快速中低压柱色谱法处理，洗脱溶剂为1:10-10:1的甲醇-水或乙醇-水，混合比例1:9-9:1的流分富含环烯醚萜类化合物的流分。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，反相色谱柱的填料为RP-18，RP-8或RP-2。