[发明专利]一种人羊膜上皮细胞体外免疫调控淋巴细胞分子机制的检测方法

权利要求书

1.一种人类AECS体外免疫抑制作用分子机制的检测方法，其包括下述步骤： 

S1：羊膜上皮细胞分离培养与鉴定； 

S2：免疫荧光染色法检测羊膜上皮细胞中PD-L1表达； 

S3：PD-L1mAb阻断AECS对T细胞增殖的抑制作用检测； 

S4：AECS与T细胞体外共培养及PD-L1阻断实验； 

S5：T细胞活性早期标志CD69的检测； 

S6：AECS对活化T细胞周期影响的检测； 

S7：AECS对活化T细胞细胞因子分泌影响的检测。 

2.如权利要求1所述的一种人类AECS体外免疫抑制作用分子机制的检测方法，其中所述步骤1AECS的分离及培养过程如下：选用剖宫产后的人羊膜，大小约15*15cm,分离、去除残留的绒毛膜，PBS（Gibco BRL公司），洗尽血迹后用0.125%胰酶，37°C消化10min,重复4次，1000rpm,离心6min收集，用PBS洗3次后接种在含10%FBS+RPMI1640培养皿中，于37°C含5%CO2空气的培养箱内培养。 

3.如权利要求1所述的一种人类AECS体外免疫抑制作用分子机制的检测方法，其中所述步骤3开始使用的人外周血T淋巴细胞的分离纯化方法如下：取健康人外周血用淋巴细胞分离液常规分离外周血单个核细胞，贴壁后吸出富集的T细胞，再经磁珠分选纯化，纯化后的T细胞纯度达到95%以上。