[发明专利]一种冬虫夏草原草粉的高纯基因组DNA提取方法

权利要求书

1.一种冬虫夏草原草粉的高纯基因组DNA提取方法，依次包括如下步骤： 

(1)取冬虫夏草原草粉，置于无菌的研钵中； 

(2)加入液氮迅速研磨至粉末； 

(3)将研磨后的粉末过筛； 

(4)将过筛后的粉末转移到1.5ml的离心管中，加入裂解液进行裂解处理； 

(5)在裂解处理后的样品中加入等体积的氯仿异戊醇(24∶1)，离心抽提； 

(6)取上清液，加入RNA酶处理； 

(7)加入蛋白酶K处理； 

(8)重复步骤(6)； 

(9)取上清液，异丙醇沉淀DNA； 

(10)70％预冷乙醇洗涤脱盐2次； 

(11)纯化DNA。

2.如权利要求1的方法，其中步骤(1)取0.25g原草粉。 

3.如权利要求1的方法，其中步骤(2)液氮研磨的时间控制在10s以内。 

4.如权利要求1的方法，其中步骤(3)将研磨后的粉末过120目筛。 

5.如权利要求1的方法，其中步骤(4)加入裂解液组成为：2％CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)、100mM Tris-HCl(三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐)pH8.0、1.4M NaCl(氯化钠)、20mM EDTA(乙二胺四乙酸二钠)、1.5％polyvinyl-pyrrolidone，PVP(聚乙烯吡咯烷酮)、0.5％2-mercaptoethanol(β巯基乙醇)。 

6.如权利要求1的方法，其中步骤(4)加入裂解液700μl，并置于水浴锅中65℃恒温处理30min。 

7.如权利要求1的方法，其中步骤(5)离心转速为13000rpm，离心时间为10min。 

8.如权利要求1的方法，其中步骤(6)加入的RNA酶终浓度为60μg/ml，处理条件为37℃，30min。

9.如权利要求1的方法，其中步骤(7)加入的蛋白酶K终浓度为120μg/ml。处理条件为37℃，30min。 

10.如权利要求1的方法，其中步骤(9)中加入的异丙醇体积为上清液体积的0.8倍，4℃沉淀15min后，13000rpm离心2min。 

11.如权利要求1的方法，其中步骤(10)中加入的70％预冷乙醇体积为500μl。 

12.如权利要求1的方法，其中步骤(11)中采用OMEGA公司生产的DNA纯化试剂盒进行纯化。