[发明专利]特异于流感病毒H5亚型或者N1亚型的血凝素和神经氨酸酶的单克隆抗体及其应用

说明书

本申请为申请日为2008年9月12日、申请号为200880115546.4、发明名称为“特异于流感病毒H5亚型或者N1亚型的血凝素和神经氨酸酶的单克隆抗体及其应用”的发明专利申请的分案申请。 

发明领域

本发明涉及检测和治疗禽流感病毒(“AIV”)的抗体和相关的结合蛋白。更具体地，本发明涉及可用于检测和治疗AIV的高致病性H5和N1亚型的单克隆抗体及相关的结合蛋白，以及涉及诊断、监视和治疗动物和人体内AIV感染的方法和产品。 

发明背景 

H5N1禽流感病毒也许成为下一次流感流行的原因。每年甲型流感感染的爆发是持续的公共健康威胁，新的流感毒株可以周期性呈现，人对于其具有较低的免疫性，导致破坏性流行。1918年由H1N1流感病毒引起的“西班牙流感”爆发导致世界范围内超过4千万人死亡。H1N1的来源也许是从鸟类直接传染人，或者也许潜伏于中间宿主如猪或者仍未鉴别的另一动物宿主中(1)(在本文结尾处提供参考书目)。分别由H2N2和H3N2流感病毒引起的1957年和1968年流感流行，可能源自重配事件(reassortment)，其中一或两种适应人的病毒表面蛋白由禽流感毒株的蛋白质置换(2)。 

H5N1病毒具有感染史无前例范围的宿主的能力，包括食肉动物。1997年证实第一例感染的人。高致病性H5N1感染在禽类和人类中均发生。这是已发现的首次禽流感病毒从鸟类直接传播至人类。之后，根据世界卫生组织(WHO)报告，人H5N1感染病例总数从2003年在东南亚开始爆发至今已经有281例，死亡169例。印度尼西亚在2005年6月报道其首例人H5N1病毒所致禽流感病例。迄今为止，这是唯一一个给出2007年报道的国家，截至2007年3月共81例证实的人感染病例，其中63例死亡。 

流感病毒根据其核蛋白和基质蛋白抗原特异性分类。这些病毒主要被分为A、B和C血清型，A型具有8个RNA节段，其编码十个病毒蛋白。 所有已知的A型流感病毒均源自鸟类。这个类别的病毒可以感染其它物种，如马、猪、猫头鹰和海豹，并且对人类造成威胁(23)。根据包膜糖蛋白的抗原性性质，可以将A型流感病毒进一步分为亚型，根据血凝素(“HA”)分为H1至H16亚型，根据神经氨酸酶(“NA”)分为N1至N9亚型(24，25，26)。据信在HA1-HA2连接处的HA蛋白质的蛋白酶解与禽流感毒株的病原性相关，而且在这个裂解位点周围疏水性氨基酸的存在是H5亚型的特点。此外，据信HA蛋白质介导与宿主细胞sialoside受体附着，随后通过膜融合进入细胞(27)，HA蛋白质被认为作为中和抗体的主要靶位(26)。 

在急性呼吸系统疾病爆发期间进行检测可以确定流感是否是爆发原因。在流感季节，检测呈现与流感一致的呼吸系统疾病的选择患者可帮助确定流感是否存在于特定患者群中，并且帮助卫生保健人员确定怎样使用其临床判断诊断和治疗呼吸系统疾病。快速流感检测帮助确定是否使用抗病毒药物。一些检测如病毒培养、逆转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)以及血清学检测是常规方法，但是不能及时获得结果而为临床医生提供帮助(3)。目前常用的大多数快速诊断检测是基于单克隆抗体的免疫测定(3，4，5)。免疫荧光测定(荧光抗体染色)是另一种快速流感病毒诊断检测法，其可用于许多医院实验室中，且通常可以在2-4小时内产生结果。首要的是特异性单克隆抗体产生是大多数常用的快速、灵敏性和有成本效益的诊断方法的基础。 

区域性独特的亚系的鉴别表明H5N1病毒是地理学广泛分布的，具有遗传和抗原性差异。种系发生学研究示出来自印尼的所有病毒形成H5N1基因型Z病毒的一个独特亚系，提示这种爆发可能由于单一引入传播遍及整个国家造成的(14，15)。获得特异性识别印尼流感分离株的单克隆抗体是非常有益的。获得也覆盖越南和新加坡流感分离株的这种mAb也是非常有益的。 

发明目的 

本发明的目的是提供特异性结合AIV的H5和N1亚型的、特别是结合H5和N1 Indonesia AIV分离株的单克隆抗体(mAb)及相关的结合蛋白。单克隆抗体应答的特异性为有效诊断试剂提供基础。衍生自其中的mAb和结合蛋白也可以用作治疗剂。 

发明概述