[发明专利]一种用于鹅肉表面细菌数直接计数的无损检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及生肉以及加工制熟后产品的微生物学检验的技术领域，特别涉及鹅肉加工前、后的细菌数测定方法。

背景技术

食品所含细菌数常以细菌总数或菌落总数表示，是食品卫生学中的重要微生物指标，主要作为判别食品被污染程度的一个重要标志。具体应用于观察食品中细菌繁殖动态、食品的新鲜程度、预测食品的卫生质量、预测食品的存放期限，以及对食品及其生产进行卫生学的总体评价。

食品细菌数测定法，有现行列入我国国家标准方法的细菌菌落总数测定——平板菌落计数法，其检验方法是：在玻璃平皿内，接种1ml水浸样或稀释水浸样于加热液化的营养琼脂培养基中，冷却凝固后在37℃培养24h，培养基上的菌落数乘以水样的稀释倍数即为食品的细菌总数。有的国家把培养温度定为35℃或其他温度，也有把培养时间定为48h的。这种方法精度高，但耗时需要一天以上，难以满足在线检测的实际工作需要，加之取样会破坏样品组织结构，增加了样品成本。

近年来国内外报道的新方法还有阻抗检测法、Simplate^TM全平皿计数法、微菌落培养计数法、纸片法等检测方法，但这些方法都至少需要为时4h的微生物培养时间，其取样均采用称量法，对整禽来说，会破坏外表结构，影响造型，无法满足生产车间在线监测、即时报告的要求。

表面积取样法属于无损取样法，我国规定允许应用于食品器具、餐具的采样，有滤纸黏贴法，棉棒涂布法。滤纸黏贴法要消耗一定规格的专用无菌滤纸，对不同部位进行涂布，棉棒涂布法需要将专用规格板贴于肉表面，使用的无菌棉棒只能一次性使用。滤纸黏贴法、棉棒涂布法两种采样法得到的样品均需以无菌水洗涤、稀释、培养24h后计数,因而不能用于生产车间的在线快速检测。

对于来自健康动物的肉品，其微生物往往先污染表面，并逐渐由外而内，在污染初期，肉中心的细菌数低于表面，但在保藏的中后期，特别是接近腐败变质时，两者细菌数相当，而在腐败后，可能由于表面较为干燥等原因（如风鹅），分布于表面的细菌数低于肉中心的细菌数。对于车间生产的食品，如果接近腐败变质，则用表面取样代替中心取样计数是可行的，也是国外通用的方法，其细菌数标准（个/cm2）往往比中心取样的标准（个/g）高出一个数量级。

肉品表面细菌数的测定，国内外均使用滤纸粘贴取样法，其所得样品需经无菌水浸渍、振摇、样品稀释、倾注平板、控温培养等，显然不属于快速检测范畴。

以触片镜检观察细菌的形态与大小，是兽医临床微生物学检验技术领域为确诊致病原提供初步线索的一种定性检测的方法，由于以普通的载玻片制作触片，因而只能以一个视野为单位，显然不能满足细菌数以肉制品表面每cm2为计数单位的要求。

如何能快速地检测肉类食品的细菌数，为广大肉制品加工业提供不破坏样品组织结构，具有在线、实时、无损取样、耗材少特点，操作方便、省时，可使用于生产过程中对食品新鲜度评价与在线检测的实用技术，是食品卫生检验领域面临的一个长期未得到解决的严峻的技术问题。

发明内容

本发明目的是提出一种快速、准确、适合在线检测的用于鹅肉表面细菌数直接计数的无损检测方法。

本发明的技术方案是：将经消毒的血球计数板对着鹅肉表面作轻触按压制成触片，凉干后，经火焰固定、染色、水洗、沥干后镜检，最后利用血球计数板固有的格的面积换算出样品中单位面积的细菌个数。

本发明通过构建一种以血球计数板为载体的触片计数新方法，只花费极短时间在显微镜下操作，稍加计算便可得出结果。

本发明优点：

1、选用血球计数板为载体制作细菌触片，一是利用其固有的格的面积换算出单位面积肉类食品的细菌总数，避免了使用模具和涂布棒（表面涂布法，需要预消毒）、量剪滤纸（滤纸黏贴法，需要预消毒）操作，提高了数据精确度（普通载玻片只能以（个/视野）为单位概略定量），二是计数板可以重复利用，降低采样耗材。

2、本发明取样操作在瞬间完成（比表面涂布法省时3min，比滤纸黏贴法省时10min），只要根据食品的流量准备计数板，可在较短时间内完成对多个可疑单元食品的同时取样，取样的时效性强。

3、原食品保持完好无损（优于重量法），有利于新鲜合格食品的进一步加工，减少样品耗材。

4、触片经染色后在显微镜下观察，即行直接计数，每个样品检测时间低于1h（其他表面积法均需要将样品控温培养4h-24h），具有在线监测的功能。

5、可采用以一个计数板的两个计数室的计数值的平均值报告结果，满足统计学要求。