[发明专利]一种人类免疫缺陷病毒抗体确认试剂

说明书

技术领域

本发明是涉及生物应用技术领域，特别是涉及用于一种人类免疫缺陷病毒抗体确认试剂的体外诊断试剂。 

背景技术

自人类免疫缺陷病毒(HIV)引起的艾滋病在20世纪80年代发现以来，已传遍全球。据联合国艾滋病总署(UNAIDS)报告，至2010年底，全球感染艾滋病人数达3700万。我国目前大约有HIV感染者70余万。迄今为止尚无有效的药物及疫苗来治疗和预防艾滋病，因而HIV感染已成为当今全球威胁最为严重的传染病及公共卫生问题。正由于此，HIV感染的监测受到世界各国的高度重视，WHO、美国FDA及许多发达国家已于1985年相继制定了有关供血者、血液制品等筛选检查的法规，其中HIV抗体的检测被列为常规。我国在1987年就颁布了《艾滋病监测管理的若干规定》，在1990年和1994年又制定了有关献血员检查HIV抗体及加强供血员血样检验用体外免疫诊断试剂的质量控制，实行了批批检定的规定，确保HIV检测试剂盒有稳定的质量，从而有效的控制了HIV感染的传播。 

由于HIV病毒的易变性，目前还没找到有效的疫苗，也没有有效药物进行有效治疗。当前控制HIV病毒传播的最有效手段就是尽早发现病毒携带者，尽早隔绝传染源。 

对HIV感染者的诊断主要以检测抗体为主。检测方法有凝聚法、间接免疫荧光法、ELISA、金标试剂、蛋白印迹法等。第一个获得美国FDA批准用于检测HIV抗体的试剂盒是美国Abbott(亚倍)公司的ELISA试剂盒，之后许多国家的ELISA试剂盒也相继投入市场，我国检测HIV抗体的ELISA试剂盒是1989年问世的。间接免疫荧光法和凝聚法由于操作过程繁琐，受影响因素较多，已较少采用。胶体金法是近年来发展起来的常用的检测方法。目前应用最为普遍的是采用ELISA或胶体金人群进行初步筛选，然后对有感染可疑的样本用蛋白印迹(Western Blot，WB)法进行确认，称为抗体确认试剂。目前WB法国内外只有少 数几个公司生产，并且反应时间长，操作烦琐。 

发明内容

本发明目的是提供一种人类免疫缺陷病毒抗体确认试剂，具有操作简便、快速、适合现场检测和经济实用等优点。 

本发明提供一种人类免疫缺陷病毒抗体确认试剂，其特征在于，试剂包括HIV抗体试纸洗涤液、显色系统、阳性对照品、阴性对照品和免疫层析结果判读仪；所述HIV抗体试纸上包被了10条蛋白条带，分别是HIV1 gp160、gp120、P66、p51、gp41、p24、p17、HIV2 gp36和2条不同浓度的人IgG条带；胶体金标记的抗人IgG或SPA，或是生物素标记的抗人IgG或SPA、胶体金标记的亲和素显色系统。HIV抗体试纸结构为NC膜、NC膜下方紧密连接的吸样垫和装载NC膜及吸样垫的塑料外壳；NC膜从一端开始，依次包被的10条蛋白条带为高浓度人IgG，HIV gp160、gp120、P66、p51、gp41、p24、p17、HIV2 gp36和低浓度人IgG。胶体金直径为20-100nm。 

其中，所述HIV抗体抗确认试剂的反应结果通过免疫层析结果判读仪是一种光学检测系统进行判定。所述人类免疫缺陷病毒抗体确认试剂，HIV抗体试纸制备方法如下： 

1、包被NC膜：将蛋白用0.01M的磷酸盐缓冲液稀释成0.001-2mg/ml，优选为，高浓度人IgG为0.05mg/ml，低浓度人IgG为0.005mg/ml，gp160为1.0mg/ml，gp120为0.8mg/ml，p66为0.8mg/ml，p 55为0.8mmg/ml，p51为0.8mg/ml，gp41为0.8mg/ml，p31为0.5mg/ml，p24为0.5mg/ml，p17为0.5mg/ml，gp36为0.6mg/ml；NC膜选用0.45um孔径的膜，宽度为40mm，长度为300mm；将稀释好的抗体装载在喷膜机上，按1ul/cm划线，各线的间隔为2-4mm，优选为3mm；划线完成后，将NC膜置于30％以下的湿度，干燥4小时以上。 

2、制备试纸：将NC膜横向切成3-8mm的宽度，优选为5mm，在NC膜下部垫上吸样垫，吸样垫为吸水材料，吸水能力不低于2ml，然后装入大小合适的塑料卡内，形成试纸。 

所述人类免疫缺陷病毒抗体确认试剂，显色系统的制备方法为：