[发明专利]金银花快速组培繁殖方法

权利要求书

1.金银花快速组培繁殖方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

⑴制备培养基：

①用二水氯化钙400mg/L、硝酸钾1900mg/L、硝酸铵250mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、硫酸铵220mg/L、硝酸镁320mg/L、磷酸二氢钠40mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、碘化钾0.83mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、四水硫酸锰22.3mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、肌醇100mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、盐酸吡哆辛0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、烟酸0.5mg/L、IBA0.0001mg/L、6-BA0.0004mg/L、白糖30g/L、卡拉胶6g/L制备pH=5.8的分化和丛生芽培养基；

②用二水氯化钙200mg/L、硝酸钾950mg/L、硝酸铵125mg/L、磷酸二氢钾85mg/L、硫酸铵110mg/L、硝酸镁160mg/L、磷酸二氢钠20mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、碘化钾0.83mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、四水硫酸锰22.3mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、肌醇100mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、盐酸吡哆辛0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、烟酸0.5mg/L、IBA0.003mg/L、卡拉胶6g/L、白糖20g/L、活性炭500mg/L制备pH=5.8的生根培养基；

③将配制好的各培养基装进灭菌器里灭菌，调节温度达到121℃时,记时灭菌21分钟，灭菌完后，把灭菌好的培养基迅速转移储存起来后待用；

⑵金银花外植体的采集：从室外选取健壮、无病虫害带腋芽或顶芽的金银花嫩茎段，剪去叶，留叶柄基部；

⑶金银花外植体的消毒：将采集的金银花外植体放入1%浓度的洗衣粉水中冲洗3-5分钟，再放到浓度为0.1%的升汞液中处理15-17分钟，同时加入0.1%的链霉素，然后用无菌水清洗4-5次，彻底除去升汞；

⑷诱导和分化培养：接着取出外植体，接种在分化培养基上，每管接种1芽，培养温度25-28℃，湿度50%，光照强度1500-3000Lx，光照时间为每天10-12小时；材料接种15天后，基部产生少量黄白色的愈伤组织，19-21天逐渐形成丛生芽，24-26天腋芽长出2-3cm；

⑸增殖培养：待腋芽长出2-3cm时，再进行分段处理，剪切成长度为2.0-2.5cm的茎段，将茎段转接至丛生芽增殖培养基上，每瓶培养4-6芽，培养温度25-28℃，湿度50%，光照强度1500-3000Lx，光照时间为每天10-12小时，经过24-26天，芽苗长到2.0-3.0cm，在丛生芽增殖倍率达3-5倍时，调低培养温度至21℃，每天增加光照时间至12-14小时；

⑹生根培养：选取生长健壮，高达2.5cm的无根小苗，切成单株后接种到生根培养基上，在温度23-25℃、湿度50%，光照强度1500-3000Lx，光照时间为每天10-12小时的环境下培养13-15天，小苗将长出白色短根，生根率达50%，20天时，生根率达85%。