[发明专利]一种具有双荧光基团的质粒及其作为标准品的应用

权利要求书

1.一种质粒，包括表达盒甲和表达盒乙；所述表达盒甲包括启动子甲、特异DNA片段甲和终止子甲；所述表达盒乙包括启动子乙、特异DNA片段乙和终止子乙；

所述特异DNA片段乙为编码序列表的序列3所示的hFluc蛋白的DNA分子；

所述特异DNA片段甲为如下（a）或（b）：

（a）自上游至下游依次包括如下元件：hRluc1片段、hRluc2片段、特异DNA片段丙、所述hRluc2片段和hRlu3片段；所述hRluc1片段、所述hRluc2片段和所述hRlu3片段顺次连接后编码序列表的序列4所示的hRluc蛋白；编码所述hRluc蛋白的起始密码子位于所述hRluc1片段上；编码所述hRluc蛋白的终止密码子位于所述hRlu3片段上；

（b）自上游至下游依次包括如下元件：hRluc-X片段、特异DNA片段丙、所述hRluc-X片段和hRluc-Y片段；所述hRluc-X片段和所述hRluc-Y片段顺次连接后编码序列表的序列4所示的hRluc蛋白；编码所述hRluc蛋白的起始密码子位于所述hRluc-X片段上；编码所述hRluc蛋白的终止密码子位于所述hRluc-Y片段上；

所述（a）和/或所述（b）中，所述特异DNA片段丙中具有终止所述特异DNA片段甲连续编码的终止密码子；所述特异DNA片段丙中具有多克隆位点。

2.如权利要求1所述的质粒，其特征在于：所述hRluc2片段由300-500个核苷酸组成。

3.如权利要求2所述的质粒，其特征在于：所述hRluc2片段如序列表的序列2自5’末端第993至1392位核苷酸所示；所述hRluc1片段如序列表的序列2自5’末端第694至992位核苷酸所示；所述hRlu3片段如序列表的序列2自5’末端第1908至2144位核苷酸所示。

4.如权利要求1至3中任一所述的质粒，其特征在于：所述特异DNA片段丙如序列表的序列1自5’末端第7至121位核苷酸所示。

5.如权利要求4所述的质粒，其特征在于：所述特异DNA片段甲如序列表的序列2自5’末端第694至2144位核苷酸所示。

6.如权利要求1至5中任一所述的质粒，其特征在于：所述启动子甲为SV40早期增强子-启动子；所述终止子甲为Synthetic poly(A)。

7.如权利要求1至6中任一所述的质粒，其特征在于：所述所述特异DNA片段乙如序列表的序列2自5’末端第3047至4699位核苷酸所示。

8.如权利要求1至7中任一所述的质粒，其特征在于：所述启动子乙为单纯疱疹病毒胸苷激酶启动子；所述终止子乙为SV40late poly(A)。

9.如权利要求1至8中任一所述的质粒，其特征在于：所述质粒还包括抗性筛选基因。

10.权利要求1至9中任一所述的质粒在鉴定TALENs的敲除效率中的应用。