[发明专利]人抗表皮生长因子受体抗体

说明书

本申请是申请日为2005年3月21日的中国专利申请200580015481.2“人抗表皮生长因子受体抗体”的分案申请。

技术领域

本发明关系到表皮生长因子受体(EGFR)特异的单克隆抗体。这些抗体可以用于治疗含肿瘤性疾病和过度增生性疾病在内的疾病。

背景技术

正常细胞的增生是通过生长因子酪氨酸激酶(RTKs)被其各自的配体激活所致，该过程是高度受控的。虽然肿瘤细胞的增生也是通过生长因子受体激活达成，但却失去了对正常增生的精确控制。许多因素可以导致这种失控，如生长因子和/或受体的过度表达，生长因子所调节的生物化学通道的自主激活。涉及到肿瘤生成的RTKs的例子有表皮生长因子受体(EGFR)、血小板源性生长因子(PDGFR)、胰岛素样生长因子(IGEF)、神经生长因子(NGEF)和成纤维细胞生长因子(FGF)。这些生长因子与其细胞表面的受体的结合导致受体被激活，从而激活并改变信号传导通路，引起细胞增生和分化。

表皮生长因子(EGF)受体家族成员为特别重要的与表皮细胞的肿瘤化有关的生长因子受体酪氨酸激酶。最早发现的EGF受体家族成员为在许多类型的肿瘤细胞上都有表达的EGFR。EGFR被发现涉及到调节肿瘤细胞的分裂、生长、修复、存活、血管生成、浸润和转移。

EGFR是一个170kD的跨膜糖蛋白，有一个细胞外配体结合功能域、穿膜区段和一个细胞内蛋白酪氨酸激酶功能域。刺激EGFR的配体包括表皮生长因子(EGF)、转化生长因子(TGF-α)、肝素结合生长因子(HBGF)、β-cellulin和Cripto-1。配体的特异性结合引起EGFR自主磷酸化，从而活化细胞内酪氨酸激酶功能域并启动调节肿瘤生长和存活的多种信号传导通路。EGFR通路也影响肿瘤内其他血管生成因子，如VEGF和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的产生。

激活EGFR的生长因子被认为也在肿瘤血管生长中发挥重要作用。血管生成指从胚胎和成年生物体已有的血管上形成毛细血管，是已知的肿瘤生长、存活和转移的关键因素。有报道称EGFR介导的肿瘤细胞刺激导致血管生成因子，血管内皮生长因子(VEGF)、白介素-8(IL-8)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达增强，从而引起肿瘤相关的血管内皮细胞的活化。肿瘤相关的血管内皮细胞的刺激也可通过肿瘤产生的生长因子，如TGF-α和EGF激活自身的EGF受体引起。

已有人体肿瘤表达和过量表达EGFR的报道，EGFR的表达与不良预后、低存活率和/或高转移率成相关关系。EGFR，由于涉及到肿瘤形成，已经成为抗肿瘤治疗的特异性靶目标。这些治疗主要包括阻断配体结合到受体细胞外功能域的单克隆抗体或直接作用于细胞内区段以防止信号传导的合成的酪氨酸激酶抑制剂。

例如，Cetuximab Mab为一种能够与人EGFR细胞外功能域特异性结合的重组人/鼠嵌合的单克隆抗体，Cetuximab是一种阻断配体与EGFR结合、防止受体活化，从而抑制表达EGFR的肿瘤细胞生长的EGFR拮抗剂。西妥昔单抗(Cetuximab)已被批准与依立替康联合或单独用药以治疗表达表皮生长因子受体的、对基于依立替康的化疗无效或不耐受的转移结肠直肠癌患者。西妥昔单抗也已显示出其对银屑病的效果。

发明内容

本发明提供特异于EGFR、优选特异于包括选自含有SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14的一组序列的EGFR细胞外区的从1到6的互补决定区的任何区域的单克隆抗体或其片段。优选抗体为人源性抗体，更优选的是本发明中的抗体或其片段含有SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6。可选但也是优选的是本发明中的抗体或其片段含有SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14。更为优选的是本发明中的抗体或其片段含有SEQ ID NO：8重链可变区和SEQ IDNO：16轻链可变区。本发明中的这些抗体或其片段具有多种特性，包括中和EGFR及防止EGFR的配体与其受体的结合的能力。

此外，本发明提供编码本抗体及其片段的分离的多核苷酸，同时也提供含有被操作性地连接到表达序列上的这些多核苷酸序列的表达载体。本发明也提供含有表达载体或其子代的重组宿主细胞，该细胞表达本发明中的抗体或其片段。本发明还提供生产这些抗体或其片段的方法，包括在一定条件下培养细胞以使抗体或其片段得以表达，然后从细胞或细胞培养基中纯化获得抗体或其片段。