[发明专利]一种9-羰基-10,11-去氢泽兰酮的快速提取检测方法

说明书

技术领域

本发明属于分析化学技术领域，涉及一种9-羰基-10，11-去氢泽兰酮的快速提取检测方法。 

背景技术

紫茎泽兰(Eupatorium adenophorum Spreng)是一种世界性恶性有毒杂草，自20世纪40年代从缅甸、印度、越南等国边境传入我国以来，迅速遍及云南、贵州、广西、四川、西藏等省区。紫茎泽兰的繁殖能力强，传播速度快，以每年30公里的速度向北、向东推进。在国家总局公认的首批入侵国内的16种外来物种黑名单中，紫茎泽兰名列第一，被称为生物癌症。其中9-羰基-10，11-去氢泽兰酮为紫茎泽兰的主要致肝脏毒性成分及杀虫的生物活性成分。因此有必要建立一种能在常规实验室推广应用的高效提取检测9-羰基-10，11-去氢泽兰酮的技术。 

发明内容

本发明的目的克服现有技术中的缺陷，提供一种9-羰基-10，11-去氢泽兰酮的快速提取检测方法，能快速的提取EUPTOX A，并精确的检测其纯度，为科学研究提供了技术基础。 

其具体技术方案为： 

一种9-羰基-10，11-去氢泽兰酮的快速提取检测方法，包括以下步骤： 

A、样品预处理：采集紫茎泽兰叶片在没有阳光的地方阴干或冻干，然后粉碎； 

B、甲醇超声一步提取法：称取上述A步骤样品，溶于甲醇，置于40MHz超声提取器或超声波清洗器，在40℃超生提取30min，提取2-3次，即提取完全，过滤得到滤液； 

C、减压蒸干：将步骤B所得的滤液在旋转蒸发仪中40℃减压蒸干，得到浸膏，按浸膏与甲醇的用量比为1∶5溶解，待完全溶解加入蒸馏水至甲醇含量为20％进行分散； 

D、萃取：上述C步骤的甲醇水提液用乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯的量为甲醇水提液的1/2，取上层减压蒸干得到浸膏，为了提取率高可进行多次萃取； 

E、硅胶拌样，干法上样进行硅胶柱层析：按浸膏与硅胶H的用量比为1∶1～1∶2，搅拌混合后，加入层析柱后，先用二氯甲烷做洗脱液，洗去低极性杂质；再用二氯甲烷∶乙酸乙酯(98∶2，v/v)洗脱，收集洗脱液，减压蒸干得到浸膏； 

F、过树脂：浸膏溶于甲醇∶水∶三氯甲烷85∶10∶5(v/v/v)溶剂中，上XAD-2/D101大孔 树脂柱洗脱以除去色素等杂质，收集洗脱液，减压蒸干得到粗品，粗品反复硅胶层析，并且分时间段收集洗脱液，薄层色谱法对洗脱液进行分类及合并同类项，展开剂为石油醚∶丙酮/12∶1(v/v)，Rf值为0.45的收集液为所提取物质； 

G、HPLC检测：上述F步骤所得物质用HPLC进行浓度检测，HPLC条件：C18色谱柱规格为：250mm×4.6mm，5.0μm；流动相为20％-100％的甲醇；流速为1mL·min^-1；进样量10μL；检测波长为255nm；柱温为25℃；梯度洗脱时间程序为0-10min。 

步骤B中样品和甲醇的质量比为1∶10。 

步骤E中浸膏与硅胶H的用量比1∶2。 

步骤G中，梯度洗脱时间程序为10min。 

与现有技术相比，本发明的有益效果为： 

1.本提取方法采用的是甲醇超声一步法提取，避免了提取液的多次转移而造成的污染、损失等误差，充分保证了测定结果的准确性和可靠性。 

2.提取方法涉及的仪器非常简单。所需的主要设备器材仅为测定干重时使用的烘箱，分析天平和甲醇提取时使用的超声提取器、旋转蒸发仪、冰箱等等，在普通实验室均可以操作。 

3.另外，本提取方法操作简单，大大减轻了工作强度，大大降低了提取的成本。 

4.本发明中采用的HPLC检测方法可将毒素的保留时间缩短在10min内。该检测方法值得在9-羰基-10，11-去氢泽兰酮毒素的检测中广泛应用推广。 

附图说明

图1为本发明一种9-羰基-10，11-去氢泽兰酮毒素的快速提取检测方法的工艺流程图。 

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明的技术方案作进一步详细地说明。 

实施例1 

A、样品预处理：采集紫茎泽兰叶片在没有阳光的地方阴干，然后粉碎； 

B、甲醇超声一步提取法：称取上述A步骤样品20g，溶于100ml的甲醇，置于40MHz超声波清洗器，40℃超生提取30min，提取2次，即提取完全，过滤得到滤液；