[发明专利]一种时间分辨荧光法综合检测胰腺癌试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种时间分辨荧光法综合检测胰腺癌试剂盒，把四种胰腺癌肿瘤标志物CA242、CA50、CEA、CA199综合在同一微孔的同一反应体系内，采用时间分辨荧光免疫法检测，其特征在于：该试剂盒包括：分别抗CA242、CA50、CEA、CA199第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板；用Eu³⁺标记的抗CA242、Tb³⁺标记的抗CA50、Sm³⁺标记的抗CA199、Dy³⁺标记的抗CEA第二株单克隆抗体混合抗体；分析缓冲液；共用荧光增强剂；洗涤液；质控品。

2.根据权利要求1所述的时间分辨荧光法综合检测胰腺癌试剂盒，其特征在于：所述的第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板的制备方法为：把分别抗CA242、CA50、CEA、CA199第一株单克隆抗体混合抗体用包被缓冲液稀释，制得抗体包被液，然后向微孔板的每个孔中分别加入100μl的所述抗体包被液，于37℃包被2小时，然后用生理盐水冲洗微孔板三次，然后再向微孔板的每个孔中分别加入200μl的封板液，于室温封闭2小时或置于4℃环境中过夜，然后用生理盐水冲洗微孔板两次，冷冻干燥，制得第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板。

3.根据权利要求2所述的时间分辨荧光法综合检测胰腺癌试剂盒，其特征在于：所述抗体包被液中，分别抗CA242、CA50、CEA、CA199的第一株单克隆抗体的浓度均为0.009～0.017g/L。

4.根据权利要求1所述的时间分辨荧光法综合检测胰腺癌试剂盒，其特征在于：所述的用Eu³⁺标记的抗CA242、Tb³⁺标记的抗CA50、Sm³⁺标记的抗CA199、Dy³⁺标记的抗CEA第二株单克隆抗体混合抗体中，用Eu³⁺标记的抗CA242抗体、Tb³⁺标记的抗CA50抗体、Sm³⁺标记的抗CA199抗体、Dy³⁺标记的抗CEA抗体的质量配比为：Eu³⁺标记的抗CA242抗体:Tb³⁺标记的抗CA50抗体:Sm³⁺标记的抗CA199抗体:Dy³⁺标记的抗CEA抗体=（2～6）:（5～9）:（6～11）:（7～10）。

5.根据权利要求1所述的时间分辨荧光法综合检测胰腺癌试剂盒，其特征在于：所述共用荧光增强剂的制备方法为：解离部分：将70～200μmol的PTA、2～7μmol的氧化钇、0.6g的Triton X-100和300ml的乙醇混合，用水定容至1升，用乙酸调pH值至3.5，制得解离部分；增强部分：将0.1～0.4mmol的邻菲罗啉和0.2mol的Tris混合，用水定容至1L，制得增强部分。

6.根据权利要求1所述的时间分辨荧光法综合检测胰腺癌试剂盒，其特征在于：所述洗涤液的制备方法为：在浓度为0.01mol/L、pH值为7.4的PBS缓冲液中加入吐温-20，混匀，制得吐温-20质量百分比浓度为0.05%的PBS溶液，然后用质量百分比浓度为0.2%的NaN₃溶液防腐处理，制得洗涤液。

7.根据权利要求1所述的时间分辨荧光法综合检测胰腺癌试剂盒，其特征在于：所述质控品为CA242、CA50、CEA、CA199标准品的混合物。

8.一种权利要求1-7任一所述的时间分辨荧光法综合检测胰腺癌试剂盒在综合检测胰腺癌肿瘤标志物CA242、CA50、CEA、CA199中的应用。